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CTSZ基因甲基化状态及其表达程度与高级别胶质瘤预后的相关性研究

作　者: 马国佛
导　师: 王江飞
学　校: 首都医科大学
专　业: 外科学
关键词: 高级别胶质瘤 DNA甲基化芯片组织蛋白酶Z 增值侵袭免疫组化生存分析
分类号: R739.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的基因测序以及表观遗传修饰的高通量分析为胶质瘤提供了新的亚型分类方法，并发掘出一些与胶质瘤的细胞生物学特性及预后相关的靶分子。这些靶分子具有潜在的诊断和预测预后的价值。我们前期对北京天坛医院的44例III级胶质瘤（即间变胶质细胞瘤）和42例IV级胶质瘤（即胶质母细胞瘤）进行了DNA甲基化芯片分析，发现在这两组病人中组织蛋白酶Z（cathepsin Z CTSZ）的甲基化状态有明显差异，故本实验将以CTSZ做为进一步研究的对象，探讨其基因甲基化状态、表达程度与高级别胶质瘤的预后相关性以及在胶质瘤的发生发展中的作用。方法1提取DNA：按照QIAamp DNA Mini Kit的步骤从冰冻肿瘤组织提取基因组DNA。提取的DNA浓度及纯度的测定使用NanoDrop ND-1000spectrophotometer。2，基因组DNA甲基化分析：用甲基化芯片分析86例高级别胶质瘤标本（44例间变胶质瘤及42例GBM）。甲基化芯片采用Illumina InfiniumHuman Methylation27K Bead-Chips。该芯片可检测27,578个CpG位点，覆盖约14,000多个有参考序列的基因。基因组DNA亚硫酸钠修饰、芯片处理及数据分析完全按照人类基因组学实验室遗传学威康信托中心的步骤。3，体外功能试验：用SiRNA处理U251细胞，观察细胞生物学行为变化。用Western印迹检测CTSZ的表达；MTT法测定SiRNA作用前后胶质瘤细胞的增殖能力，并用Transwell法研究胶质瘤细胞的侵袭能力。4，统计学处理：基因芯片显著性分析（significanceanalysis of microarrays, SAM）44例间变胶质瘤和42例GBM甲基化差异基因，Cox回归分析使用Matlab2009b软件。累计生存率用Kaplan-Meier法计算，Log-rank检验。所有统计分析由GraphPad Prism和SPSS16.0软件包完成。以Ｐ0.05为差异有统计学意义；结果DNA甲基化芯片显示在高级别胶质瘤中，胶质母细胞瘤甲基化水平低于间变胶质瘤，运用t检验进行统计学分析，P值为0.003<0.05；在III级胶质瘤中CTSZ基因的表达水平低于胶质母细胞瘤，统计学分析P值为0.034；甲基化程度和表达水平与预后相关性显示，在III级与IV级中甲基化程度低，表达水平高的患者预后差，与TCGA数据库中验证CTSZ甲基化水平与表达量与预后关系相一致；胶质瘤U251细胞被SiRNA处理后其增值和侵袭能力明显下降。结论在多形性胶质母细胞瘤中CTSZ基因甲基化水平低于间变胶质细胞瘤，在同级别肿瘤细胞中CTSZ基因甲基化程度高，其侵袭和增值能力弱，相反，甲基化程度低的肿瘤细胞其侵袭和增值能力强。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-8
前言  8-9
材料与方法  9-25
实验结果  25-32
讨论  32-35
结论  35-36
参考文献  36-40
综述  40-46
  参考文献  44-46
英文缩略语表  46-48
攻读学位期间发表文章情况  48-49
致谢  49-50
个人简历  50

CTSZ基因甲基化状态及其表达程度与高级别胶质瘤预后的相关性研究

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