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重度子痫前期子宫小动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的改变

作　者: 侯晓钰
导　师: 傅晓冬
学　校: 泸州医学院
专　业: 妇产科
关键词: 重度子痫前期子宫小动脉大电导钙激活钾通道
分类号: R714.245
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：重度子痫前期（Severe preeclampsia,SPE）属于妊娠期高血压疾病的一类。妊娠期高血压疾病的基本病理变化是全身小动脉痉挛，外周阻力血管的张力增加。血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）参与了血管的张力调节，主要是通过其上的离子通道发挥作用。其中，大电导钙激活钾通道（large conductance calcium-activated potassium channels,BKCa）的开放和关闭对血管的舒缩起重要影响。重度子痫前期时，血压的增高是否与大电导钙激活钾通道的改变具有相关性对我们研究其发病机制有重要意义。因此，本实验运用膜片钳技术从离子通道水平研究重度子痫前期是否与BKCa通道改变有关，为揭示该病的发病机理以及防治提供一定的理论依据。方法：运用单通道膜片钳实验将于2012年6月至2013年3月在我院产科住院分娩，无其它并发症和合并症，需要进行剖宫产手术的患者分为两组：重度子痫前期8例、正常足月妊娠（Normal latepregnancy）8例，取子宫剖面含丰富血窦的肌层组织，分离子宫动脉，纵向剖开并撕成约2mm×2mm的组织块，分别置于酶液Ⅰ和酶液Ⅱ中进行消化。选择胞膜完整、光滑、折光性佳的平滑肌细胞进行实验。在浴液中，用膜片钳分别以细胞贴附式和内面向外式记录细胞膜上BKCa的电流信号，并将滤波处理过的膜片钳放大器放大的电流信号储存于计算机中，经pClamp6.0软件系统采集电流信号，Clampfit10.1软件分析数据。比较正常妊娠晚期和重度子痫前期的孕妇子宫动脉平滑肌细胞BKCa电流信号的变化。结果：1、采用两步法急性酶分离出的妊娠期人子宫小动脉平滑肌细胞数量较多，成活率高。细胞大多呈蚯蚓状、梭形﹑或是香蕉状，包膜完整，折光性好，能满足膜片钳实验需要；2、两步法急性酶分离的妊娠期人子宫小动脉平滑肌细胞BKCa单通道电流具有以下特性：（1）浴液与电极液为对称性高钾溶液，内面向外式膜片下,记录到BKCa通道的电导值为207.2±12.7pS（n=8），通道具有电压依赖性和钙离子敏感性。（2）在外面向外式膜片下（Vm=+30mV），200nM的BKCa通道特异性阻断剂IbTX（Iberiotoxin）能阻断通道活动。3、重度子痫前期孕妇子宫动脉平滑肌BKCa的变化:在细胞贴附式膜片下(Vm=+40mV)，正常妊娠组BKCa通道开放概率（Open Probability，NPO)为0.007±0.0017、电流幅值（amplitude of current，Amp）为7.627±0.727pA、平均开放时间（the meanopen time，TO）为7.216±1.003ms、平均关闭时间（the mean close time，Tc）为879.445±149.716ms;重度子痫前期组BKCa通道开放概率为0.0017±0.0005、电流幅值为4.399±0.464pA、平均开放时间为1.642±0.348ms、平均关闭时间为930.791±264.157ms。两组BKCa通道开放概率、电流幅值、平均开放时间比较，差异显著，有统计学意义(P<0.01)，而BKCa通道平均关闭时间比较差异无统计学意义（P=0.6398）结论:1.本实验采用两步法急性酶分离妊娠期子宫小动脉，可得适用于膜片钳实验的平滑肌细胞。2.分离出的子宫小动脉平滑肌细胞单通道电流为BKCa单通道电流，具有电导值大、钙依赖和电压依赖等特性。3.在细胞贴附式膜片上，重度子痫前期患者较正常妊娠足月孕妇的子宫小动脉平滑肌细胞BKCa通道的开放概率、电流幅值、平均开放时间降低。提示BKCa通道的功能活动减弱可能参与了重度子痫前期的发生。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-10
前言  10-12
材料与方法  12-17
结果  17-23
讨论  23-30
展望  30-31
结论  31-32
参考文献  32-38
中英文缩略词对照表  38-39
致谢  39-40
综述  40-52
  参考文献  47-52

重度子痫前期子宫小动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的改变

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