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NF-κB及其调控的miRNA在宫颈癌移植瘤及癌旁组织中的活化和表达

作　者: 甘自立
导　师: 林红
学　校: 南昌大学医学院
专　业: 肿瘤学
关键词: 宫颈癌 NF-κB miRNA-15b miRNA-16
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：研究宫颈癌移植瘤小鼠的癌与癌旁组织中miR-15b，miR-16的表达状况以及NF-κB信号通路在宫颈癌癌旁组织活化情况，为宫颈癌的早期诊断和治疗提供新思路。方法：采用小鼠宫颈癌U14细胞悬液建立小鼠腹水瘤模型，传3代后将腹水瘤细胞接种于30只昆明小鼠右侧腋窝皮下建立皮下移植瘤模型。待瘤块直径大小为1.5cm×1.5cm时（约15日后），将其颈椎脱臼处死，取癌组织与距离癌组织2cm以上的癌旁组织，以及正常的脂肪组织，应用实时荧光定量PCR方法检测各标本中miR-15b，miR-16的表达状况，利用免疫组化检测NF-κB（p65）蛋白在各组织中细胞质和细胞核的表达及定位情况。结果：1. U14细胞悬液接种于雌性昆明小鼠腹腔，2周后腹水瘤模型成功建立，取其腹水瘤细胞建立皮下移植瘤模型，2周后成瘤率100%，移植瘤切片行HE染色，可见宫颈癌细胞浸润皮下脂肪生长，造模成功。2.实时定量检测miR-15b和miR-16在宫颈癌组织及癌旁组织的表达情况，miR-15b在宫颈癌组织中表达为32.21±3.67，明显高于癌旁组织的25.16±1.86和正常组织的1.00（P<0.05），癌旁组织也显著高于正常组织（P<0.05）；miR-16在宫颈癌组织中表达为28.63±2.34，明显高于癌旁组织的22.16±1.76和正常组织的1.00（P<0.05），癌旁组织也显著高于正常组织（P<0.05）。3.免疫组织化学显示在正常脂肪组织中，NF-κB（p65）蛋白主要定位于胞浆，而在癌组织与癌旁组织中，NF-κB（p65）蛋白主要位于胞核。宫颈癌组织中NF-κB（p65）蛋白的表达显著高于癌旁组织和正常组织（P<0.05），癌旁组织也显著高于正常组织（P<0.05）。结论：1. NF-κB通路在宫颈癌组织和癌旁组织中均处于活化状态。2.该信号通路调控的miR-15b和miR-16在癌组织和癌旁组织中亦为高表达状况。3. NF-κB通路及其相关的miR-15b和miR-16可能参与了宫颈癌发生的早期分子事件。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-9
第1章引言  9-13
第2章材料与方法  13-21
  2.1 材料  13-15
    2.1.1 实验细胞株  13
    2.1.2 实验动物  13
    2.1.3 主要试剂及材料  13-14
    2.1.4 主要仪器与设备  14-15
  2.2 方法  15-20
    2.2.1 主要试剂配制  15-16
    2.2.2 肿瘤模型的建立  16-17
    2.2.3 成功建立皮下移植瘤，剥离肿瘤  17
    2.2.4 实时荧光定量 PCR 检测 miR-15b 和 miR-16 的表达  17-18
    2.2.5 免疫组化检测NF-κB（p65）蛋白在各组织中细胞质和细胞核的表达情况  18-20
  2.3 统计学处理  20-21
第3章结果  21-25
  3.1 成功建立小鼠腹水瘤模型和皮下移植瘤模型  21
  3.2 miR-15b 和 miR-16 在癌组织及癌旁组织的表达  21-23
  3.3 免疫组化检测 NF-κB（p65）蛋白在各组织中表达和定位  23-25
第4章讨论  25-29
  4.1 miRNA在肿瘤中的异常表达  25-26
  4.2 抑制NF-κB活性在宫颈癌中的治疗意义  26
  4.3 肿瘤微环境对肿瘤治疗产生的影响  26-29
第5章结论  29-30
致谢  30-31
参考文献  31-35
攻读学位期间的研究成果  35-36
综述  36-43
  参考文献  42-43

NF-κB及其调控的miRNA在宫颈癌移植瘤及癌旁组织中的活化和表达

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