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NF-κB信号通路在张应力介导的成纤维细胞凋亡中的作用

作　者: 高洁
导　师: 张广耘
学　校: 青岛大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: hPDLFs 周期性张应力 NF-κB 凋亡
分类号: R780.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的本课题通过构建成纤维细胞的体外培养—力学刺激模型,对hPDLFs施加不同时间的周期性张应力,用Hochest染色、流式细胞术、RT-PCR等观察细胞凋亡的发生时机和变化规律。借助Western-blot等手段研究周期性张应力作用下成纤维细胞中NF-κB的表达及活性变化。探讨NF-κB、周期性张应力和成纤维细胞凋亡三者之间的关系。从而解释NF-κB信号通路在张应力介导的成纤维细胞凋亡中的作用和内在机制,以及对牙周病的临床治疗提供理论基础。方法以体外培养的hPDLFs为实验对象。实验分为对照组(Oh加力组)和加力6h,12h,24h共四组。细胞所受力值大小以培养皿底部硅胶膜拉伸应变率(%)表示,拉伸率越大,表示细胞所受张力越大。加力组细胞的力值定为15%,频率为1/6HZ,即周期为6s,每一循环包括3 s牵张和3 s松弛。通过Hochest,流式细胞术,RT-PCR检测细胞凋亡的情况,用Western-blot等检测不同实验组中磷酸化P65的表达。加力前对细胞施加特异性抑制剂PDTC,对细胞施加相同的张应力后检测几组细胞的凋亡变化和磷酸化P65的表达。应用SPSS18.0统计软件包对实验数据进行统计学分析。结果1.在大小为15%,频率为1/6HZ的周期性张应力作用下hPDLFs可在细胞加力培养板中生长,且生长状态发生随着加力时间的变化发生明显变化,满足体外力学刺激模型研究需求。2.Hochest,流式细胞术,RT-PCR结果显示本实验对hPDLFs施加15%,1/6HZ的周期性张应力可以促进hPDLFs凋亡。3. hPDLFs凋亡随着加力时间的延长而增加,12h时达到最高峰值,继而凋亡率开始下降但仍然高于未加力组。4. Western-blot检测在各加力组中磷酸化P65均有表达,6h时表达最为显著,12h时降至低谷,之后开始回升,与加力后的hPDLFs凋亡呈相反趋势。5.加入PDTC的hPDLFs在周期性张应力作用下,磷酸化P65的表达明显减少,但细胞凋亡的数量显著增多。结论1.本研究构建了稳定的hPDLFs体外培养-力学刺激模型,为后续hPDLFs的力学研究提供了依据,能满足目前细胞力学研究的要求。2.大小为15%,频率为1/6HZ的周期性张应力可促进hPDLFs凋亡。3. hPDLFs凋亡与周期性张应力的作用时间在一定范围内呈正相关。4.磷酸化P65的表达越高则hPDLFs凋亡率越低,提示NF-κB在此过程中可能起到了抗凋亡作用,NF-κB信号通路是参与调控张应力诱导的hPDLFs凋亡的重要通路之一。

NF-κB信号通路在张应力介导的成纤维细胞凋亡中的作用

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