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激活α7nAChR对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

作　者: 李福菁
导　师: 李泉
学　校: 南昌大学医学院
专　业: 麻醉学
关键词: PNU-282987 新斯的明 阿托品 HMGB1 NF-κB α7nAChR
分类号: R657.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）激动剂对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法：第1部分：将60只成年雄性C57BL/6小鼠麻醉后随机分为4组（n=15只）：对照组（Sham组）、肝脏I/R组（I/R组）、PNU-282987+肝脏I/R组（P+I/R组）、新斯的明+阿托品+肝脏I/R组（X+A+I/R组）。除Sham组术前注射生理盐水预处理外，其他组小鼠均于缺血前腹腔内注射PNU-282987或新斯的明和阿托品预处理，并通过阻断门静脉、肝动脉供应肝脏左中叶血管60min造成肝脏I/R损伤。在肝脏再灌注后3h、6h、12h时间点收集小鼠血液及肝脏组织标本。通过测定血浆中转氨酶浓度，HE检测肝脏组织学变化评估肝脏损伤程度。采用RT-PCR方法检测炎性因子基因表达变化。第2部分：将45只成年雄性C57BL/6小鼠麻醉后随机分为3组：对照组（Sham组）、肝脏I/R组（I/R组）、PNU-282987+肝脏I/R组（P+I/R组）。在肝脏再灌注后3h、6h、12h时间点收集小鼠肝脏组织标本。采用免疫组织化学法检测高迁移率家族蛋白1（high-mobility group box1,HMGB1）的表达变化，同时通过western blot方法检测HMGB1和核转录因子κB（nuclear factor-kappa B, NF-κB）蛋白表达情况来分析潜在的机制。结果：第1部分：与Sham组相比，I/R组小鼠血浆转氨酶水平及炎性因子mRNA表达均明显升高，并且可看到肝脏组织形态明显遭到损伤（p<0.05）。不管是PNU-282987还是新斯的明和阿托品预处理小鼠均能有效降低血浆转氨酶水平，抑制炎性因子表达，减轻肝损伤（p<0.05）。第2部分：与Sham组相比，I/R组小鼠肝脏HMGB1及NF-κB蛋白表达明显升高，PNU-282987预处理抑制NF-κB激活及HMGB1蛋白的表达（p<0.05）。结论：α7nAChR激动剂通过抑制HMGB1蛋白高表达，降低炎性因子和抑制激活，对小鼠肝脏I/R损伤起到保护作用。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-6
目录  6-9
第1章 引言  9-13
第2章 材料与方法  13-29
  2.1 实验材料  13-17
    2.1.1 实验动物  13
    2.1.2 手术器材  13
    2.1.3 药品试剂  13-14
    2.1.4 主要试剂的配制及引物序列  14-16
    2.1.5 主要仪器及设备  16-17
  2.2 实验方法  17-28
    2.2.1 C57BL/6 小鼠 70%肝脏缺血再灌注损伤模型建立  17-18
    2.2.2 实验分组  18-19
    2.2.3 标本收集  19
    2.2.4 血清 ALT、AST 检测  19
    2.2.5 肝脏组织形态学观察  19-20
    2.2.6 RT-PCR 法检测肝脏各种炎性因子 mRNA 表达  20-24
    2.2.7 肝组织 HMGB1 免疫组化检测  24-25
    2.2.8 Western blot 法检测 HMGB1、NF-κB-p65 的表达  25-28
  2.3 统计分析  28-29
第3章 实验结果  29-39
  3.1 肝脏 I/R 损伤模型制作效果  29
  3.2 PNU-282987、新斯的明联合阿托品预处理对小鼠血清 ALT、AST 的影响  29-31
  3.3 肝脏组织病理形态学观察 PNU-282987、新斯的明和阿托品预处理对肝脏 I/R 损伤的影响  31-32
  3.4 PNU-282987、新斯的明联合阿托品预处理对肝脏 I/R 损伤引起小鼠肝脏炎性因子 mRNA 表达的影响  32-35
  3.5 免疫组化观察 PNU-282987 预处理对肝脏 I/R 损伤 HMGB1 表达的影响27  35-36
  3.6 Western-blot 测定 HMGB1 蛋白表达变化  36-37
  3.7 Western-blot 测定 NF-κB-p65 蛋白表达变化  37-39
第4章 讨论  39-44
第5章 结论与展望  44-45
  5.1 结论  44
  5.2 展望  44-45
致谢  45-46
参考文献  46-50
攻读学位期间的研究成果  50-51
综述  51-59
  参考文献  57-59

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 外科学各论 > 腹部外科学 > 肝及肝管
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