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藏药余甘子鞣质部位体内成分分析
作 者: 吴玲芳
导 师: 张兰珍
学 校: 北京中医药大学
专 业: 中药化学
关键词: 含量测定 HPLC特征图谱 人工胃液肠液 鞣质部位 药代动力学研究 余甘子
分类号: R29
类 型: 硕士论文
年 份: 2014年
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内容摘要
余甘子为常用藏药,具有抗病毒、抗菌、抗炎、增强免疫、抗氧化、保肝、抗肿瘤、降血糖、保护心血管等多种药理作用。本论文在课题组前期研究基础上,对余甘子鞣质部位进行体内、体外代谢成分分析。研究探讨余甘子鞣质部位在人工胃液、人工肠液中的稳定性;建立了余甘子鞣质部位血清样品处理方法和3种指标成分没食子酸、柯里拉京、鞣花酸血清内含量测定方法;通过血清成分HPLC指纹图谱分析得到原型成分和代谢成分;通过对不同时间点3个成分血清含量测定得到3个成分的平均药时曲线,为余甘子临床应用和开发利用提供依据。本论文分为五章第一章文献综述余甘子为大戟科Euphorbiaceae叶下珠属植物余甘子Phyllanthus emblicaL.的干燥成熟果实,为常用藏药。余甘子性味甘、酸、涩、凉,归肺、胃经,具有清热凉血、消食健胃、生津止咳的功效,广泛地用于血热血瘀、消化不良、腹胀、咳嗽、喉痛、口干等症。余甘子在藏医药中应用十分广泛,在《藏药标准》所载的290种中成药中,含有余甘子的成药占总数的29%。从1990年版的《中国药典》起,余甘子开始作为藏药被收载。余甘子富含鞣质、酚酸、黄酮、多糖和维生素C等多种成分,现代药理研究表明,余甘子提取物具有抗病毒、抗菌、抗炎、增强免疫、抗氧化、保肝、抗肿瘤、降血糖、保护心血管等多种药理作用。本章查阅了103篇余甘子相关文献,对余甘子化学成分、药理作用进行总结归纳,为余甘子血清成分动态变化研究提供基础。第二章余甘子鞣质部位制备及含量测定1.制备5批余甘子鞣质部位。将1000g余甘子药材,粉碎过5目筛,60%乙醇60℃连续温浸提取3次,每次提取时间为9小时,每次溶剂用量均为8000mL,合并三次提取液,浓缩至无醇味,离心取上清液;采用HPD400型大孔吸附树脂富集方法,对余甘子鞣质部位进行富集,浓缩后干燥成粉末。2.测定5批鞣质部位的总鞣质含量。参考《中国药典》建立了余甘子总鞣质含量测定的方法,760nm处测定吸光度,没食子酸标准曲线:Y=0.293X+0.017,r=0.9999(n=8),没食子酸在0.40~3.20μg·mL-1范围内线性良好。5批余甘子总鞣质含量分别为:58.53、56.73、55.71、57.53、55.54%。3.HPLC法测定了5批鞣质部位中3种成分没食子酸、鞣花酸、柯里拉京的含量。没食子酸标准曲线:Y=2E+06X-40665,r=0.9999,线性范围为:0.0468~1.12μg,5批余甘子鞣质部位中没食子酸含量分别为:4.55、4.61、4.46、4.49、4.60%:柯里拉京标准曲线:Y=85883X-13156,r=0.9999,线性范围为:0.275~11.00μg,5批余甘子鞣质部位柯里拉京含量分别为:1.60、1.64、1.58、1.61、1.61%:鞣花酸标准曲线:Y=3E+06X-73345, r=0.9999,线性范围为:0.036-1.08μg,5批余甘子鞣质部位鞣花酸含量分别为:3.64、3.66、3.73、3.63、3.67%。第三章余甘子鞣质部位体外胃肠液中稳定性考察1.余甘子鞣质部位在人工胃液、人工肠液中的稳定性考察:采用人工模拟胃液、肠液,考察余甘子鞣质部位在人工胃液、肠液中的稳定性。实验表明余甘子鞣质部位在人工胃液中比较稳定,12h内总鞣质量变化RSD<15%;在人工肠液中不稳定,12h内总鞣质量变化RSD>15%。2.没食子酸、柯里拉京、鞣花酸在人工胃液、人工肠液中的稳定性考察:采用人工模拟胃液、肠液,考察余甘子中主要成分没食子酸、柯里拉京、鞣花酸在人工胃液、肠液中的稳定性。结果显示没食子酸、柯里拉京、鞣花酸在人工胃液中都比较稳定,12h内RSD<15%;没食子酸、柯里拉京在人工肠液中不稳定,RSD>15%,而鞣花酸由于结构稳定,在各种溶剂中溶解度较小,12h内鞣花酸量变化不大,RSD<15%。3.可水解鞣质单元没食子酸、鞣花酸对可水解鞣质柯里拉京稳定性影响:采用人工模拟肠液,考察可水解鞣质水解单元没食子酸、鞣花酸对余甘子中可水解鞣质柯里拉京在人工肠液中稳定性的影响,探讨二者能否抑制可水解鞣质柯里拉京的水解。结果显示没食子酸可以很好抑制柯里拉京的水解,柯里拉京色谱峰由原来的6h消失延长到12h以后。而鞣花酸的加入不能抑制可水解鞣质柯里拉京的水解。4.柯里拉京单独在人工肠液中很不稳定,其RSD为141.42%,鞣花酸加入柯里拉京可增加其在肠液中稳定性,但不是很明显,RSD由141.42%降为102.84%。说明可水解鞣质鞣花酸可以抑制柯里拉京的分解,但由于鞣花酸溶解度很小,抑制可水解鞣质水解的效果不很明显。没食子酸加入柯里拉京可显著增加其在肠液中稳定性,RSD由141.42%降为36.38%,说明可水解鞣质单元没食子酸可以有效抑制柯里拉京的分解。而存在于鞣质部位中的柯里拉京在人工肠液中很稳定,RSD由141.42%降为23.47%,说明鞣质部位中共存的多种成分能很好的抑制可水解鞣质柯里拉京的分解。提示可水解鞣质有效部位在肠液中比鞣质单体显示出较好的稳定性可能会提高其体内的疗效。第四章余甘子鞣质部位血清化学成分动态变化研究本章对余甘子鞣质部位中主要鞣质类成分在血清中成分动态变化进行研究。采用SD大鼠灌胃余甘子鞣质部位后,研究血清中鞣质部位HPLC色谱图和主要成分代谢特点,为进一步探索余甘子药效物质基础及质量控制提供依据。1.HPLC法测定血清中没食子酸、柯里拉京、鞣花酸含量方法学考察。建立了余甘子鞣质部位中3个成分没食子酸、柯里拉京和鞣花酸的体内HPLC定量分析方法:没食子酸体内回归方程为:Y=0.155X-0.059,r=0.9991(n=6),线性范围为0.78-12.48μg.mL-1,最低检测线LOD为0.39μg.mL-1;柯里拉京体内回归方程:Y=0.062X-0.109,r=0.9985(n=6),线性范围为2.24~7.47μg.mL-1,最低检测线LOD为1.12μg.mL"1;鞣花酸体内回归方程:Y=0.044X-0.001,r=0.9981(n=6),线性范围为1.03-13.73μg.mL-1,最低检测线LOD为0.51μg.mL-1。2.药代动力学研究通过对余甘子鞣质部位灌胃大鼠12h血清成分分析,得到了没食子酸、柯里拉京、鞣花酸的3个成分的药代动力学参数和药时曲线。没食子酸:Tmax为1h,Cmax为1.28μg/mL,T1/2为8.99h,AUC为15.31μg/mL*h, MRT为14.29h;柯里拉京:Tmax为2h,Cmax为6.09μg/mL,T1/2为11.65h,AUC为89.38μg/mL*h,MRT为17.11h;鞣花酸:Tmax为1h,Cmax为10.47μg/mL,T1/2为3.07h,AUC为46.59μg/mL*h,MRT为4.99h。平均药时曲线结果见图4-8、4-9、4-10。3.余甘子鞣质部位血液移行成分HPLC分析建立了灌胃余甘子鞣质部位大鼠血清样品的处理方法和HPLC色谱条件,比较余甘子鞣质部位化学指纹图谱、余甘子鞣质部位灌胃给药4h后血清色谱图、空白血清色谱图,结果显示余甘子鞣质部位入血成分有46个,其中17个成分在鞣质部位化学指纹图谱中有对应色谱峰,通过添加对照品方法确定了其中没食子酸、柯里拉京和鞣花酸3个成分,入血成分中有7个色谱峰面积增大,6个色谱峰明显减少,另外29个成分在鞣质部位色谱图中没有对应色谱峰,可能为代谢新产生的成分。第五章总结与讨论1.建立了分光光度法测定余甘子总鞣质含量的方法,制备的5批余甘子鞣质部位的总鞣质含量为:58.53、56.73、55.71、57.53、55.54%。平均含量为57.04%,RSD值为1.73%.2.建立了HPLC法测定余甘子鞣质部位中没食子酸、柯里拉京和鞣花酸含量的方法。没食子酸标准曲线:Y=2E+06X-40665,r=0.9999,线性范围为:0.0468~1.12μg,5批余甘子鞣质部位中没食子酸含量分别为:4.55、4.61、4.46、4.49、4.60%;柯里拉京标准曲线:Y=85883X-13156,r=0.9999,线性范围为:0.275-11.00μg,5批余甘子鞣质部位柯里拉京含量分别为:1.60、1.64、1.58、1.61、1.61%;鞣花酸标准曲线:Y=3E+06X-73345,r=0.9999,线性范围为:0.036~1.08μg,5批余甘子鞣质部位鞣花酸含量分别为:3.64、3.66、3.73、3.63、3.67%。3.建立了余甘子鞣质部位12h胃肠稳定性HPLC特征图谱。4.得出了余甘子鞣质部位在人工胃液中比较稳定,在人工肠液中不稳定。5.3个主要成分没食子酸、柯里拉京、鞣花酸在人工胃液中比较稳定,在人工肠液中不稳定。6.在人工肠液中没食子酸可以抑制可水解鞣质柯里拉京的水解,而鞣花酸则不能抑制可水解鞣质柯里拉京的水解。7.建立了余甘子鞣质部位灌胃给药大鼠血清12h指纹图谱。8.建立了3个主要成分没食子酸、柯里拉京、鞣花酸血清HPLC含量测定的方法。没食子酸体内回归方程为:Y=0.155X-0.059,r=0.9991(n=6),线性范围0.78-12.48μg.mL-1,最低检测线LOD为0.39μg.mL-1;柯里拉京体内回归方程:Y=0.062X-0.109,r=0.9985(n=6),线性范围2.24~7.47μg.mL-1,最低检测线LOD为1.12μg.mL-1;鞣花酸体内回归方程:Y=0.044X-0.001,r=0.9981(n=6),线性范围1.03~13.73μg.mL-1,最低检测线LOD为0.51μg.mL-1。9.建立了余甘子鞣质部位中没食子酸、柯里拉京、鞣花酸的药代动力学参数并绘制了3个成分的平均药时曲线图。没食子酸:Tmax为1h,Cmax为1.28μg/mL,T1/2为8.99h,AUC为15.31μg/mL*h,MRT为14.29h;柯里拉京:Tmax为2h,Cmax为6.09μg/mL,T1/2为11.65h,AUC为89.38μg/mL*h,MRT为17.11h;鞣花酸:Tmax为1h,Cmax为10.47μg/mL,T1/2为3.07h,AUC为46.59μg/mL*h,MRT为4.99h。10.建立了给药4h后血液移行成分变化。结果显示余甘子鞣质部位入血成分有46个,其中17个成分在有效部位色谱图中有对应色谱峰,通过添加对照品方法确定了其中没食子酸、柯里拉京和鞣花酸3个成分,入血成分中有7个色谱峰面积增大,6个色谱峰明显减少,另外29个成分在有效部位色谱图中没有对应色谱峰,可能为代谢新产生的成分。
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全文目录
目录 3-4 中文摘要 4-9 Abstract 9-12 第一章 文献综述 12-28 前言 28-29 第二章 余甘子鞣质部位制备及含量测定 29-40 摘要 29 第一节 余甘子鞣质部位制备 29-31 第二节 余甘子鞣质部位总鞣质含量测定 31-34 第三节 余甘子鞣质部位中没食子酸、鞣花酸、柯里拉京3种成分含量测定 34-40 第三章 余甘子鞣质部位体外胃肠液中稳定性考察 40-60 摘要 40 第一节 余甘子鞣质部位在人工胃液中稳定性考察 40-44 第二节 余甘子鞣质部位在人工肠液中稳定性考察 44-48 第三节 没食子酸、柯里拉京、鞣花酸3种成分人工胃液稳定性考察 48-52 第四节 没食子酸、柯里拉京、鞣花酸3种成分人工肠液稳定性考察 52-56 第五节 没食子酸、鞣花酸在人工肠液中对柯里拉京稳定性影响 56-60 第四章 余甘子鞣质部位血清化学成分动态变化研究 60-95 摘要 60 1 仪器、试利及动物 60 2 方法与结果 60-95 讨论 95-96 总结 96-97 创新点 97-98 参考文献 98-104 致谢 104-105 个人简历 105-106
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中国少数民族医学
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