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电针对兔膝骨关节炎软骨p38表达的影响

作　者: 王江林
导　师: 胥方元
学　校: 泸州医学院
专　业: 康复医学与理疗学
关键词: 骨关节炎软骨细胞电针 p38丝裂原活化蛋白激酶
分类号: R245
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：骨关节炎（osteoarthritis，OA）又叫作退行性骨关节病，好发于中老年人，以关节软骨进行性退化变性、软骨下骨质反应性变化及关节边缘的骨赘形成为病理特点，是负重关节的常见疾病。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases, MAPKs)是细胞内重要的信号传递者，参与了多种生理过程的调节，被认为在OA发病过程中发挥着重要作用。软骨中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)是MAPKs中的亚型之一，它在软骨细胞凋亡、细胞因子产生、转录调节及缺血再灌注损伤中起重要作用，它参与胶原蛋白网络断裂，蛋白多糖降解，是反映OA病变程度的特异性指标，在正常软骨中少见，但在OA软骨中则有明显升高。针灸能疏通经络、调和阴阳,能促进细胞增殖、蛋白质合成、刺激胶原和细胞因子生成，可以促进软骨、韧带和肌腱等组织损伤的修复，对OA具有镇痛、消肿、改善关节活动功能的作用。本课题通过观察电针治疗对兔膝OA的软骨大体形态变化、软骨细胞病理改变，以及对软骨细胞p38表达的影响，探讨电针对兔膝OA模型软骨细胞修复的影响及作用机制。方法：（1）对象和干预措施：健康新西兰大耳兔36只，随机分为三组，每组12只。正常组12只兔常规饲养，不给予任何干预措施。模型组12只兔和电针治疗组12只兔都采用通过管型石膏将左膝关节保持于伸直位制动固定的方法建立本实验所需OA模型。正常组和模型组在饲养6周后通过耳缘静脉注入空气处死，切开左膝关节，取内侧髁软骨观察造模后相关指标变化。治疗组12只兔饲养6周后进行电针治疗14d，以同样的方法处死并观察治疗后相同指标改变情况。电针治疗采取患膝关节“内膝眼、外膝眼、阳陵泉、血海、足三里和梁丘”6个穴位电针治疗，电压6V,疏波4HZ，密波20HZ，脉冲宽度0.5ms，输出强度2mA，每天1次，每次电针30min，连续治疗14d。（2）观察指标：①观察三组兔软骨标本的大体形态变化；②将软骨标本制成切片，HE染色和甲苯胺蓝染色，光镜观察相关指标的变化，并且按Mankin’s评分标准进行评分，用抗兔的p38试剂盒检测左膝关节内侧髁软骨p38含量的表达变化.（3）统计学处理：用SPSS13.0for WINDOWS进行统计学分析。所得数值结果采用x±s表示，以P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01有显著性差异。结果：(1)软骨大体观察：正常对照组兔左膝关节无明显的关节积液，软骨面外观光滑呈蓝白色，颜色深且明亮，基本无裂纹，软骨结构Mankin’s评分为0分。模型组左膝关节基本上都出现关节积液，关节面粗糙，甚至部分部位出现糜烂，全部软骨表面呈灰黄色，光泽度明显降低，表面略有不平，较粗糙；电针治疗组只有部分兔膝关节出现关节积液及滑膜增生，软骨改变仍然以粗糙为主，但程度较模型组较轻；电针治疗组与模型组的软骨结构按Mankin’s评分比较，差异有统计学意义（P<0.05）。（2）HE染色和甲苯胺蓝染色观察：正常对照组HE染色显示软骨表面基本平整，软骨层的大小匀称；细胞大小一致，潮线完整性好且甲苯胺蓝染色按规律均匀分布；模型组用HE染色可见软骨明显变薄，软骨表面出现裂隙，软骨细胞大量簇聚且数量明显减少，可见潮线紊乱同时甲苯胺蓝染色也显著变淡；电针治疗组光镜观察示软骨细胞分布比较整齐且细胞数较模型组有所增多，软骨表面相对平整，裂隙少，软骨层厚度较模型组厚，也有潮线紊乱，甲苯胺蓝染色程度失染较轻。正常对照组与模型组、模型组与电针治疗组按Mankin’s评分比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。（3）软骨免疫组化p38测定：正常对照组仅在表层软骨细胞内偶见p38弱阳性表达，为胞浆内少量黄褐色颗粒；模型组中软骨细胞基质、胞浆中都有p38表达，全层可见，尤以中层密度最高，成熟软骨细胞中最多，为深黄褐色颗粒；电针治疗组中，软骨表层可见散在的软骨细胞胞浆中存在p38表达，为浅黄褐色颗粒。在统计学上正常对照组与模型组、模型组与电针治疗组间比较，差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论:（1）本研究采取管型石膏将兔左膝关节保持于伸直位加压制动固定的方法制作兔膝OA模型揭示了OA的病理变化，本实验中造模成功。（2）p38具有加快软骨细胞凋亡，降解关节软骨细胞外基质（extracellular matrix, ECM）的作用，对加重软骨退变、破坏有着十分重要的影响。（3）电针治疗膝OA有效，其作用机制可能与抑制软骨p38的表达、减少软骨细胞的凋亡，促进基质合成等有关。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-11
前言  11-14
材料与方法  14-20
结果  20-30
讨论  30-40
结论  40-41
参考文献  41-46
英汉缩略词对照表  46-47
致谢  47-48
综述  48-55
  参考文献  53-55

电针对兔膝骨关节炎软骨p38表达的影响

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