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初生仔猪腹泻两种相关病毒分子流行病学调查及病毒分离和鉴定

作　者: 谈晨
导　师: 姜平
学　校: 南京农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪流行性腹泻病毒 呼肠孤病毒 流行病学 分离鉴定
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 7次
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内容摘要


2011年底以来,我国很多省市初生仔猪出现腹泻性疾病。病猪以腹泻、脱水、厌食、迅速消瘦为主要特征。一些研究结果显示,其主要病原包括猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒和博卡病毒等。为了进一步研究该类疾病的病原流行毒株特性,本研究收集了2012年2月-2013年3月临床发病猪群发病哺乳仔猪肠道粪便样品,进行了猪流行性腹泻病毒(PEDV)和呼肠孤病毒(REOV)检测,明确了PEDV分子流行病学特性,并分离获得2株REOV,为该病防控奠定了一定基础。本研究主要研究内容如下：1.猪流行性腹泻病毒检测与S基因分子流行病学调查本研究收集自2012年2月至2013年3月,江苏、上海、浙江等省市31个规模猪场共102份腹泻病料样品,采用RT-PCR检测PEDV,结果为：猪场阳性率67.74%,病料样品阳性率46.08%。测序获得8个流行毒株S全基因序列。8个流行毒株D基因同源性为95.3%-99.5%,与欧洲代表毒株CV777基因的同源性为94.2%-95.7%；与DR13弱毒疫苗毒株比较,其同源性为94.0%-95.8%;与2006年国内流行的LZC毒株比较,其同源性为93.6%-95.1%。S基因遗传进化树分析表明,国内外PEDV毒株可分为3群,本研究7个流行毒株属于第2群,与中国使用的疫苗毒株存在较大差异,只有1个毒株属于第1群,与韩国疫苗毒株以及欧洲毒株CV777共同组成一个分支。研究结果表明,PEDV是目前中国仔猪腹泻的主要病原之一,中国PEDV流行毒株存在明显的基因变异。2.猪呼肠孤病毒的分离鉴定与仔猪致病性研究采用上述31个规模猪场102份腹泻病料样品,应用RT-PCR检测REOV,结果为：REOV的猪场阳性率为45.16%,病料样品阳性率为26.47%。选择2份病料无菌处理后接种Vero细胞,维持液中添加5μg/mL胰酶,传代2-3次,出现细胞病变,经过RT-PCR扩增和基因序列分析,病毒粒子负染电镜观察,证明其为REOV,命名为ZJ120101和AH120411毒株。将其分别口服接种2日龄商品健康仔猪,DMEM为对照组,5mL/头,接种后隔离饲养,人工哺乳,观察临床症状,接种后5-7天进行病理观察,并检测病原。结果为：两个病毒接种组仔猪接种后不同时间出现短时的食量下降,但均无腹泻症状,对照组仔猪未见明显发病症状。病理观察结果显示,AH120411毒株组小肠有轻微鼓气,组织病变观察,盲肠肠绒毛上皮细胞破损、脱落,其余肠段未见明显病理变化,ZJ120101和对照组仔猪没有明显的病理变化。肠道组织RT-PCR检测REOV结果为：ZJ120101组和AH120411组阳性,对照组为阴性。表明两个分离株有轻度致病作用,不同REOV毒株对仔猪致病性有所差异。

全文目录


摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
上篇 综述部分  11-52
  第一章 引起仔猪腹泻的主要传染性病原  12-52
    1 猪流行性腹泻病毒  12-16
      1.1 病原生物学特征  12-13
      1.2 病毒基因组  13
      1.3 病毒基因编码的蛋白及功能  13-14
      1.4 流行病学  14-15
      1.5 临床症状与病理变化  15
      1.6 诊断技术  15-16
      1.7 PED的防制  16
    2 猪传染性胃肠炎  16-19
      2.1 病原生物学特征  16-17
      2.2 病毒基因组  17
      2.3 病毒蛋白及功能  17-18
      2.4 流行病学  18
      2.5 临床症状与病理变化  18
      2.6 诊断技术  18
      2.7 TGE的防制  18-19
    3 轮状病毒  19-22
      3.1 病原生物学特性  19
      3.2 病毒基因组  19-20
      3.3 病毒蛋白及功能  20-21
      3.4 流行病学  21
      3.5 临床症状与病理变化  21
      3.6 诊断技术  21
      3.7 预防与控制  21-22
    4 呼肠孤病毒  22-30
      4.1 病毒基本特性  22-23
      4.2 病毒基因组  23-24
      4.3 病毒蛋白及功能  24-26
      4.4 病毒复制机制  26-28
      4.5 病毒对猪的致病作用  28-29
      4.6 诊断技术  29-30
    5 肠毒素性大肠杆菌  30-33
      5.1 ETEC的细菌学特征  30
      5.2 ETEC的致病因子  30-32
      5.3 ETEC的流行病学  32
      5.4 ETEC腹泻的临床症状及病理变化  32
      5.5 诊断技术  32-33
      5.6 ETEC腹泻的防制  33
    6 猪等孢球虫  33-36
      6.1 病原特征  33
      6.2 生活史  33-34
      6.3 流行病学  34
      6.4 临床症状及病理变化  34-35
      6.5 诊断技术  35
      6.6 防制  35-36
    本课题研究目的和意义  36-37
    参考文献  37-52
下篇 试验部分  52-99
  第二章 猪流行性腹泻病毒检测与S基因分子流行病学调查  53-81
    摘要  53-54
    1 材料与方法  54-63
      1.1 病料  54
      1.2 试剂及配制  54-55
      1.3 主要仪器设备  55
      1.4 病料总RNA提取  55-56
      1.5 RT-PCR检测  56-57
      1.6 PEDV S基因扩增与克隆  57-60
      1.7 测序结果的处理和分析  60-63
    2 结果  63-76
      2.1 病料采集与RT-PCR检测  63-65
      2.2 PEDV S基因克隆与重组质粒鉴定  65-66
      2.3 S基因核苷酸序列测定结果  66-74
      2.4 S基因核苷酸序列和其编码氨基酸序列的同源性分析  74
      2.5 遗传进化树分析  74-76
    3 讨论  76-78
    ABSTRACT  78-79
    参考文献  79-81
  第三章 猪呼肠孤病毒分离与鉴定与仔猪致病性研究  81-99
    摘要  81-82
    1 材料与方法  82-87
      1.1 病料检测与处理  82
      1.2 试剂及配制  82-84
      1.3 Vero细胞的复苏与培养  84
      1.4 病毒的鉴定  84-85
      1.5 动物实验  85-87
    2 结果  87-94
      2.1 RT-PCR检测  87-89
      2.2 病毒的分离与鉴定  89-90
      2.3 人工感染试验结果  90-94
    3 讨论  94-96
    ABSTRACT  96-97
    参考文献  97-99
全文总结  99-101
致谢  101

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家畜 > 猪
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