学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

KAP26.1、KAP11.1基因在辽宁新品系绒山羊皮肤中的表达及分析

作　者: 张亭亭
导　师: 金梅
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 动物学
关键词: 辽宁新品系绒山羊 生物信息学分析 Real-time PCR 原位杂交技术
分类号: S827
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 3次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


辽宁新品系绒山羊是我国独有的宝贵品种，众所周知，其具有产绒量高、品质优良等特点。羊绒—皮肤次级毛囊的发育产物，是山羊的内层毛被，其纤维具轻、滑、软、暖等特点。绒具有优良的品质与角蛋白和角蛋白关联蛋白有密不可分的关系。角蛋白作为毛发的骨架，其含量和结构都比较稳定，但是在不同物种或同一物种中，角蛋白关联蛋白（Keratin associated protein，KAP）的含量却有较大变化。因此，毛发基质角蛋白KAP可能影响毛发的品质。为了探讨KAP基因的表达与绒山羊绒细度的关系，首先对KAP11.1、KAP26.1基因进行生物信息学分析。然后，通过RT-PCR检测KAP11.1、KAP26.1基因在各内脏组织中的表达。然后通过荧光定量PCR技术检测毛囊生长周期中的三个时期KAP11.1、KAP26.1基因在初、次级毛囊中的表达差异；最后利用原位杂交定位检测KAP11.1、KAP26.1基因在初、次级毛囊中表达位点。（1）生物信息学分析可以看出：KAP11.1基因能够表达159个氨基酸的蛋白质，这些氨基酸中半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸的含量较高，而天冬氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸的含量却偏低。蛋白结构域分析结果显示，KAP11.1含有PMG蛋白结构域。KAP26.1基因由184个氨基酸组成，具有相对低的天冬氨酸，甲硫氨酸，半胱氨酸，色氨酸含量，较高的亮氨酸和丝氨酸含量，并且还具有一个丝氨酸富集区。（2）半定量RT-PCR结果显示：KAP11.1基因在皮肤、心脏、肝脏中都有表达,但在肾、肺、脾中未发现其表达。但是在辽宁新品系绒山羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织中均未检测到KAP26.1的表达， KAP26.1基因特异表达于皮肤。（3）实时荧光定量PCR结果显示：毛囊兴盛期KAP11.1基因在次级毛囊的表达量约为初级毛囊的2.5倍，在毛囊生长退行期KAP11.1基因在初级毛囊的表达量为次级毛囊的2倍。在毛囊兴盛期，KAP26.1在次级毛囊中的表达量为初级毛囊4.74倍，且差异极为显著；进入毛囊退行期，KAP26.1在初级毛囊中的表达量为次级毛囊3.84倍，且差异极为显著。（4）原位杂交分析发现，KAP11.1基因在内根鞘有表达，毛球部有少量表达，而在基质细胞中有大量表达。而KAP26.1特异表达于内根鞘。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-10
1 绪论  10-17
  1.1 毛囊  10-12
    1.1.1 毛囊的结构  10-11
    1.1.2 毛囊的周期性变化  11-12
    1.1.3 毛囊生长的影响因子  12
  1.2 绒毛结构蛋白  12
    1.2.1 绒毛结构蛋白的分类  12
    1.2.2 绒毛结构蛋白的表达  12
  1.3 生物信息学概述  12-13
    1.3.1 生物信息学的研究内容  13
    1.3.2 生物信息学的应用前景  13
    1.3.3 生物信息学面临的困难  13
  1.4 RT-PCR 技术研究近况  13-14
    1.4.1 PCR 反应中的关键因素  14
    1.4.2 PCR 新方法  14
  1.5 实时荧光定量 PCR 技术研究近况  14-15
    1.5.1 实时荧光定量 PCR 检测方法  14-15
    1.5.2 实时荧光定量 PCR 的定量方法  15
    1.5.3 实时荧光定量 PCR 技术的应用  15
  1.6 原位杂交技术概述  15-16
    1.6.1 原位杂交技术的原理及应用  15-16
    1.6.2 原位杂交探针  16
  1.7 本研究的意义  16-17
2 辽宁新品系绒山羊兴盛期毛囊 KAP11.1、KAP26.1 基因的生物信息学分析  17-30
  2.1 序列来源  17
  2.2 方法  17
  2.3 结果  17-28
    2.3.1 KAP11.1 和 KAP26.1 基因核酸序列分析  17-20
    2.3.2 KAP11.1 和 KAP26.1 氨基酸序列分析  20-28
  2.4 讨论  28-30
3 辽宁新品系绒山羊 KAP11.1、KAP26.1 基因在各内脏组织中的表达  30-35
  3.1 实验材料  30-31
    3.1.1 实验样本  30
    3.1.2 主要试剂及仪器  30-31
  3.2 实验方法  31-33
    3.2.1 各组织中总 RNA 的提取  31
    3.2.2 反转录反应  31-32
    3.2.3 PCR 反应  32-33
  3.3 实验结果  33-34
  3.4 讨论  34-35
    3.4.1 结果讨论  34-35
    3.4.2 半定量 RT-PCR  35
4 KAP1 1.1、KAP26.1 基因在初、次级毛囊中的表达差异  35-46
  4.1 实验材料  35-36
    4.1.1 样本采集  35
    4.1.2 主要试剂及仪器  35-36
  4.2 实验方法  36-38
    4.2.1 初、次级毛囊的分离  36
    4.2.2 初、次级毛囊及退行期皮肤中 RNA 的提取  36
    4.2.3 反转录反应  36-37
    4.2.4 Real Time PCR  37-38
  4.3 实验结果  38-45
    4.3.1 RNA 提取  38-39
    4.3.2 Real Time PCR  39-45
  4.4 讨论  45-46
    4.4.1 KAP11.1 结果讨论  45
    4.4.2 KAP26.1 结果讨论  45
    4.4.3 Real Time PCR 讨论  45-46
5 KAP1 1.1、KAP26.1 基因在辽宁新品系绒山羊毛囊中的定位  46-53
  5.1 实验材料  46-47
    5.1.1 样本采集  46
    5.1.2 主要试剂及仪器  46-47
  5.2 实验方法  47-48
    5.2.1 探针的制备  47
    5.2.2 探针浓度的检测  47
    5.2.3 原位杂交  47-48
  5.3 实验结果  48-51
    5.3.1 探针浓度  48
    5.3.2 原位杂交结果  48-51
  5.4 讨论  51-53
    5.4.1 原位杂交结果讨论  51-52
    5.4.2 原位杂交技术小结  52-53
结论  53-54
参考文献  54-58
附录 A 缩略词中英文对照表  58-59
附录 B 制作探针及原位杂交试剂配方  59-60
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  60-61
致谢  61

相似论文

  1. 红肉脐橙和‘国庆四号’温州蜜柑中CHS和CHI基因的克隆与表达及其对类黄酮积累的调控机制,S666.4
  2. 高温蛋白酶Pgsey及解旋酶Htc16特征的初步研究,Q814
  3. 斯氏按蚊感染约氏疟原虫后24小时差异表达基因的筛选与分析,R531.3
  4. IL-1β在AML中的表达及功能的初步研究,R733.71
  5. 南美白对虾养殖底泥氨氧化细菌与氨氧化古菌多态性分析,S917.1
  6. MiR151和RhoGDIA在胃癌中的表达及意义,R735.2
  7. FATS mRNA表达水平与乳腺癌预后的相关性研究,R737.9
  8. GLPp16/CSP17探针在膀胱尿路上皮癌诊断中的应用,R737.14
  9. 骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞前后Ca~（2+）浓度及基因方面变化的研究,R329
  10. 大黄鱼Toll样受体免疫信号传导通路相关基因克隆与表达,S917.4
  11. 中国美利奴肉用品系羊生长轴部分基因表达对十二指肠发育的影响,S826
  12. 多发性骨髓瘤分子细胞遗传学核型分析研究,R733.3
  13. 高危型HPV感染和宫颈脱落细胞中hTERC基因表达的研究,R737.33
  14. Ebp1与食管癌和贲门癌发生发展及预后关系的研究,R735
  15. 三株DBP降解菌的筛选及其降解特性的相关研究,X172
  16. 微异养混合养下隐藏嗜酸菌DX1-1自养积累PHB基因表达差异及代谢机制研究,Q933
  17. 青葙钾营养特性分析及其高亲和钾转运体基因克隆,Q943.2
  18. 低温胁迫下柑橘正反向差减cDNA文库的构建及生物信息学分析,Q943.2
  19. PCMV DPOL基因的克隆分析及基于此基因PCR检测方法的建立与初步应用,S852.65
  20. 牙鲆HSP70与HSC70基因的克隆、表达及其SNPs与耐热性状的相关性分析,Q78
  21. 凡纳滨对虾造血激素（astakine）的表达及其功能研究,Q57

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 山羊
© 2012 www.xueweilunwen.com