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中国美利奴肉用品系羊生长轴部分基因表达对十二指肠发育的影响

作　者: 周其伟
导　师: 贾斌
学　校: 石河子大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 中国美利奴羊(新疆军垦型) 十二指肠生长轴发育 Real Time PCR
分类号: S826
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

十二指肠是重要的消化器官,担负着消化和吸收机体所需的绝大部分营养物质的功能。因此,十二肠发育的状况在很大程度上决定动物的生长速度。肠道的生长发育受到遗传、营养、环境和神经内分泌等多种因素影响。其中神经内分泌生长轴基因在胃肠道个体发育中发挥了重要角色。本文以0-90日龄的中国美利奴羊(新疆军垦型)为试验动物,测定绵羊的累积生长曲线和十二指肠长度变化；同时用荧光实时定量PCR方法,研究中国美利奴羊(新疆军垦型)生长轴相关基因在垂体,肝脏和十二指肠中的表达及其发育性变化,来探讨生长轴基因对中国美利奴羊十二指肠生长发育的影响。研究结果如下1.羔羊体重、日增重和十二指肠日增长发育变化羔羊体重和十二指肠长度的发育模式基本一致,随着日龄的增长,都呈逐渐升高趋势。羔羊体重日增重和十二指肠日增长都在0-60日龄逐渐升高并达到峰值,之后都有所降低。提示十二指肠的发育情况可能影响羔羊体重的发育变化。2.羔羊十二指肠的形态发育变化从0日龄到90日龄,羔羊十二指肠的黏膜厚度、肌层厚度、绒毛长度都呈增长趋势。0-90日龄雌、雄性羔羊十二指肠黏膜厚度增幅分别为114.80%和113.58%。羔羊十二指肠V/C比值在0、7日龄时维持在较高水平,7-30日龄逐渐下降。羔羊十二指肠结构的变化,可能是由于随日龄的增长食物结构的改变而导致的。3.羔羊垂体中GHRHR、GH基因表达的发育性变化羔羊垂体中GHRHR和GH基因表达模式相似,即在出生时较高之后逐渐下降。提示,羔羊垂体中GH基因表达可能依赖于GHRHR基因表达。雄性羔羊垂体中3HRHR mRNA在0日龄显著高于雌性羔羊(P<0.05),GH mRNA水平在7和14日龄显著(P<0.05)低于雌性羔羊,提示出生早期雌、雄羔羊GHRHR、GH基因表达可能存在着性别间差异。4.羔羊肝脏中GHR、IGF-1和I/GF-1R基因表达的发育性变化肝脏中GHR基因变化模式和垂体中GH基因表达变化模式相似,都呈先升高后下降趋势,但这种趋势具有一定的时差性,提示垂体中GH基因的表达可能上调了肝脏中GHR基因的表达。在30-90日龄肝脏中IGF-1和GHR基因表达都呈下降趋势,这说明肝脏中IGF-1基因表达可能依赖于肝脏中GHR基因的表达。羔羊肝脏组织中IGF-1和TGF-1R的基因表达量在30-90日龄呈下降趋势,这说明IGF-1R的基因表达水平的变化与IGF-1的基因表达水平的变化紧密相关。5.羔羊十二指肠中GHR、IGF-1和IGF-1R基因表达的发育性变化中国美利奴样十二指肠中GHR mRNA、IGF-1 mRNA和TGF-1R mRNA的表达呈时序性变化,且具有一定的相似性。十二指肠中GHR、IGF-1基因表达变化模式和垂体中GH基因表达变化模式相似,但这种趋势有不同程度的滞后性。这说明GH能直接作用于羔羊十二指肠调节GHR、IGF-1基因表达,从而参与十二指肠的生长发育的调控。

全文目录

摘要  5-6
目录  6-9
本文缩写的中英文对照  9-10
前言  10-11
第一篇文献综述  11
第一章十二指肠的结构、功能及其发育  11-14
  1 十二指肠的基本组织结构  11
  2 十二指肠生理功能概述  11-12
  3 反刍动物小肠发育的研究现状  12-13
  4 小肠功能发育的调节  13-14
第二章生长轴相关基因的研究进展  14-22
  1 生长轴  14
  2 生长激素释放激素及其受体  14-16
    2.1 生长激素释放激素的分子结构及分布  14-15
    2.2 生长激素释放激素作用  15
    2.3 生长激素释放激素受体概述  15-16
  3 生长激素及其受体  16-17
    3.1 生长激素的分子结构  16
    3.2 生长激素受体概述  16-17
  4 IGFs及其受体  17-18
    4.1 胰岛素样生长因子1(IGF-1)  17
    4.2 IGF-1R概述  17-18
  5 GH和IGF-1的生物学作用及对小肠生长发育的调节  18-21
    5.1 生长激素的生物学作用及其对小肠生长发育的调节  18-19
    5.2 胰岛素样生长因子1(IGF-1)的功能及其对小肠生长发育的调节  19-21
  6 组织中GH、GHR、IGF-1、IGF-1R的表达  21-22
第三章 Real time PCR  22-26
  1 Real Time PCR概述  22
  2 实时荧光定量PCR的原理  22-23
  3 实时荧光定量PCR的定量方法  23-26
第二篇实验研究  26
第四章羔羊体重、日增重和十二指肠日增长发育变化  26-29
  1 材料与方法  26
    1.1 实验动物  26
    1.2 数据统计  26
  2 结果  26-28
  3 分析与讨论  28-29
第五章十二指肠的形态发育的研究  29-33
  1 材料和方法  29
    1.1 实验设计  29
    1.2 十二指肠形态指标测定  29
  2 结果  29-31
    2.1 肠黏膜厚度与肌层厚度的变化  29
    2.2 绒毛长度与V/C值的变化  29-31
  3 分析与讨论  31-33
第六章羔羊垂体中GHRHR、GH基因表达的发育性变化  33-44
  1 材料与方法  33-35
    1.1 实验动物  33
    1.2 主要试剂和仪器  33
    1.3 荧光定量PCR测定垂体中GH、GHRHR的相对表达量  33-34
    1.4 PCR产物回收及克隆测序  34
    1.5 标准品制备  34-35
    1.6 Real time PCR  35
    1.7 数据分析  35
  2 结果与分析  35-42
    2.1 RNA样本电泳结果  35
    2.2 GHRHR、GH和β-actin基因PCR扩增结果和克隆质粒测序结果  35-37
    2.3 GHRHR基因荧光实时定量PCR的试验结果  37-39
    2.4 垂体中GHRHR基因的相对表达量  39-40
    2.5 GH基因荧光实时定量PCR的试验结果  40-41
    2.6 垂体中GH基因的相对表达量  41-42
  3 结论  42-44
第七章羔羊肝脏中GHR、IGF-1和IGF-1R基因表达的发育性变化  44-56
  1 材料与方法  44-45
    1.1 实验动物  44
    1.2 主要试剂和仪器  44
    1.3 荧光定量PCR测定肝脏中GHR、IGF-1和IGF-1R基因的相对表达量  44-45
  2 结果与分析  45-54
    2.1 肝脏中GHR、IGF-1和IGF-1R基因PCR扩增结果和克隆质粒测序结果  45-47
    2.2 GHR基因荧光实时定量PCR的试验结果  47-49
    2.3 肝脏中GHR基因的相对表达量  49
    2.4 IGF-1基因荧光实时定量PCR的试验结果  49-51
    2.5 肝脏中IGF-1基因的相对表达量  51-52
    2.6 IGF-1R基因荧光实时定量PCR的试验结果  52-54
    2.7 肝脏中IGF-1R基因的相对表达量  54
  3 结论  54-56
第八章羔羊十二指肠中GHR、IGF-1和IGF-1R基因表达的发育性变化  56-62
  1 材料与方法  56-57
    1.1 实验动物  56
    1.2 主要试剂和仪器  56
    1.3 荧光定量PCR测定十二指肠中GHR、IGF-1和IGF-1R的相对表达量  56-57
  2 结果  57-60
    2.1 十二指肠中GHR、1GF-1和IGF-1R基因PCR扩增结果  57-58
    2.2 十二指肠中GHR基因的相对表达量  58
    2.3 十二指肠中IGF-1基因的相对表达量  58-59
    2.4 十二指肠中IGF-1R基因的相对表达量  59-60
  3 结论  60-62
全文结论  62-63
参考文献  63-71
附录  71-74
作者简介  74-75
致谢  75-76
导师评阅表  76

中国美利奴肉用品系羊生长轴部分基因表达对十二指肠发育的影响

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