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不同株系绒毛白蜡的耐盐性比较及航天诱变绒毛白蜡36号RAPD分析

作　者: 李妮
导　师: 屈星
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 蔬菜学
关键词: 绒毛白蜡耐盐性航天诱变 RAPD
分类号: S792.41
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

绒毛白蜡（Fraxinus velutina Torr）为木犀科白蜡属树种，是我国北方地区最为抗盐碱的乔木树种。本研究通过对10个株系的绒毛白蜡幼苗进行不同浓度的盐处理，观察其生长状况并对各项生理生化指标进行测定，分析绒毛白蜡在不同盐胁迫时生长状况和生理生化指标的变化情况，对10个株系绒毛白蜡的耐盐性作出评价与比较；并以航天诱变的绒毛白蜡36号实生苗为材料，观察其田间生长状况和测定生长指标，并利用RAPD技术对其基因组DNA进行分析，探索研究经航天诱变后绒毛白蜡36号的变异情况。为耐盐株系的筛选和选育、绒毛白蜡耐盐性研究以及滨海盐碱地改良利用提供理论依据。结果如下：1．观察不同浓度盐胁迫对10个绒毛白蜡株系的影响，测定了绒毛白蜡的株高、叶片相对含水量、叶片相对电导率、叶绿素及各种酶活性等生理指标，并对10个株系绒毛白蜡的耐盐性进行了分析与比较。综合分析各项指标得出10个绒毛白蜡株系的耐盐性强弱顺序为R36＞R21＞R48＞R37-1＞R29＞R30＞R23＞R41＞R26＞R1。2．确定了绒毛白蜡RAPD最适反应体系为：10×PCR Buffer2.5μL、Mg2+（25mmol/L）2.0μL、引物（20μmol/L）2.0μL、dNTPs（2.5mmol/L）1.8μL、DNA模板（49.5μg/mL）2.0μL、Taq聚合酶0.3μL（5U/μL），其余用ddH2O补充。确定了适合绒毛白蜡的扩增程序：94℃预变性5min→（94℃变性30s，36℃退火30s，72℃延伸2min）44个循环→72℃延伸10min→4℃保存。PCR扩增产物用浓度为1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测。3．采用CTAB法快速提取绒毛白蜡基因组总DNA用于RAPD扩增，采用优化后的反应体系从50条RAPD随机引物（S150-S199）中筛选出多态性和重复性好、谱带清晰且稳定的12条引物，用这些引物对绒毛白蜡36号株系航天诱变的58个种子苗进行RAPD分析，结果表明，12条引物共扩增出65条带，其中58条具有多态性，多态性比例为89.23%。根据RAPD扩增结果，采用UPGMA系统聚类法分析，结果表明，当相似系数为0.72时，可将诱变的58份绒毛白蜡36号分为两大类，1-5聚为一类，6-58聚为一类。

全文目录

摘要  2-3
Summary  3-5
缩略词表  5-11
第一章文献综述  11-20
  1.1 绒毛白蜡概况  11
  1.2 绒毛白蜡耐盐性研究  11
  1.3 盐胁迫对植物的伤害  11-13
  1.4 DNA 分子标记技术  13-14
  1.5 RAPD 技术  14-16
    1.5.1 RAPD 技术的原理  14
    1.5.2 RAPD 技术的特点  14-15
    1.5.3 RAPD 技术的不足之处  15-16
  1.6 航天诱变育种  16-18
    1.6.1 航天诱变育种的概念  16-17
    1.6.2 国外航天诱变育种研究进展  17
    1.6.3 国内现状  17-18
    1.6.4 RAPD 分子标记在植物航天诱变育种中的应用  18
  1.7 本研究的目的和意义  18-19
  1.8 研究总路线  19-20
第二章 10 个株系绒毛白蜡的耐盐性比较  20-37
  1 材料与方法  20-24
    1.1 耐盐性试验材料  20
    1.2 主要试验仪器、试剂及其配制  20-21
      1.2.1 试验仪器  20
      1.2.2 主要试验试剂  20-21
    1.3 试验方法  21-24
      1.3.1 幼苗培养  21
      1.3.2 盐胁迫处理  21
      1.3.3 试验指标的测定  21-24
        1.3.3.1 株高的测定  21
        1.3.3.2 叶片相对含水量的测定  21-22
        1.3.3.3 叶片原生质膜相对透性的测定  22
        1.3.3.4 酶活性测定  22
        1.3.3.5 MDA 含量的测定  22-23
        1.3.3.6 SOD 活性的测定  23
        1.3.3.7 CAT 活性的测定  23-24
        1.3.3.8 POD 活性的测定  24
      1.3.4 试验数据分析  24
  2 结果与分析  24-33
    2.1 不同盐浓度对绒毛白蜡株高的影响  24-25
    2.2 不同盐浓度下绒毛白蜡的存活率与叶片症状  25-28
    2.3 不同盐浓度对绒毛白蜡相对含水量的影响  28
    2.4 不同盐浓度对绒毛白蜡相对电导率的影响  28-29
    2.5 不同盐浓度对绒毛白蜡叶片 MDA 含量的影响  29-30
    2.6 不同盐浓度对绒毛白蜡叶片叶绿素含量的影响  30-31
    2.7 不同盐浓度对绒毛白蜡叶片 SOD 酶活性的影响  31-32
    2.8 不同盐浓度对绒毛白蜡叶片 POD 酶活性的影响  32
    2.9 不同盐浓度对绒毛白蜡叶片 CAT 活性的影响  32-33
    2.10 各个株系绒毛白蜡株系耐盐性综合分析  33
  3 讨论  33-36
    3.1 盐胁迫对绒毛白蜡生长的影响  33-34
    3.2 盐胁迫对绒毛白蜡生理生化指标的影响  34-35
    3.3 10 个株系绒毛白蜡的耐盐性分析与比较  35
    3.4 耐盐性指标在植物耐盐性评价中的可靠性探讨  35-36
  4 结论  36-37
第三章航天诱变绒毛白蜡 36 号 RAPD 分析  37-59
  1 材料与方法  37-43
    1.1 供试材料  37
    1.2 试验设备、试验试剂及溶液的配置  37-39
      1.2.1 主要仪器  37-38
      1.2.2 试验试剂  38
      1.2.3 主要试剂的配制  38-39
    1.3 试验地概况和幼苗的田间管理及调查  39-40
      1.3.1 试验地概况  39
      1.3.2 幼苗的田间管理及调查  39-40
    1.4 方法  40-43
      1.4.1 基因组 DNA 的提取  40
      1.4.2 DNA 样品纯度及浓度的检测  40-41
      1.4.3 绒毛白蜡 RAPD 扩增反应体系的优化  41
      1.4.4 退火温度和循环次数的优化  41
      1.4.5 琼脂糖浓度优化  41-43
      1.4.6 引物筛选  43
      1.4.7 RAPD 标记分析  43
  2 结果与分析  43-55
    2.1 株高及地径的变化情况  43-45
    2.2 绒毛白蜡基因组 DNA 提取  45
    2.3 RAPD 反应条件的优化  45-53
    2.4 引物筛选  53
    2.5 RAPD 谱带记录与数据分析  53-55
      2.5.1 RAPD 条带统计及多态性的计算  53-54
      2.5.2 RAPD 聚类分析  54-55
  3 结论  55-56
  4 讨论  56-59
参考文献  59-66
致谢  66-67
附图  67-71
作者简介  71-72
导师简介  72-73

不同株系绒毛白蜡的耐盐性比较及航天诱变绒毛白蜡36号RAPD分析

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