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黄连木叶酚类物质的提取鉴定、生物活性及与精油联产的研究

作　者: 邓冠军
导　师: 吴丽芳
学　校: 安徽大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 黄连木酚类物质精油抗氧化活性秀丽隐杆线虫
分类号: S792.99
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

黄连木(Pistacia chinensis Bunge)为漆树科黄连木属落叶乔木；是一种良好的景观、材用和药用树种。黄连木种子含油量高达42.46%,出油率为20%-30%,其中不饱和脂肪酸的相对含量高达73.97%-87.41%,具有开发成优质食用油和生物柴油的潜力,已经被列为我国重要的能源林树种。黄连木的不同组织都富含酚类、黄酮等生物活性物质,果实、果柄和叶还富含精油,具有抑菌消炎、抗氧化等生物活性,传统上用于治疗痢疾、霍乱和风湿等疾病。因此,针对黄连木叶进行酚类物质和精油提取分离研究,挖掘其生物活性,可以为黄连木的综合利用提供理论和技术支撑；通过有用价值物质的发现提高其经济效益,并克服黄连木童期长和童期无收益等缺点,促进黄连木(能源林)种植业发展。本文在前期黄连木叶酚类物质提取的基础上,进行粗提物纯化,对纯化效果和相应生物学功能进行比较研究,并建立线虫活体抗氧化体系对其抗氧化效应进行验证；对精油和酚类物质进行联产探索,比较了精油提取对联产酚类物质的影响；并对酚类物质和精油的化学成分进行了初步分析。主要结果如下：1、采用硅胶柱色谱法对黄连木叶粗酚类物质进行初步纯化,并对纯化前后总酚、单宁和总黄酮等主要成分进行比较。纯化产物每克样品中总酚、单宁、总黄酮含量分别为1.0125g当量没食子酸、0.8600g当量单宁酸和0.1453g当量芦丁。与粗酚类物质相比总酚含量提高了20.54%,单宁含量提高了13.53%,总黄酮含量提高了12.03%。说明硅胶柱色谱法可以有效地对黄连木叶粗酚类物质进行纯化。2、采用DPPH自由基清除法、FRAP总抗氧化法对粗酚类物质和纯化产物进行体外抗氧化活性检测。结果表明,黄连木叶纯化酚类物质体外抗氧活性强于粗酚类物质和维生素C,但稍逊于纯度为98%茶多酚。3、以模式动物秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)为实验对象,通过检测提取物对胡桃醌诱导的线虫体内活性氧(ROS)抑制和线虫存活率的影响,建立提取物抗氧化活性活体检测方法。结果显示黄连木叶纯化酚类物质能显著提高经胡桃醌诱导的线虫存活率和降低线虫细胞内ROS浓度。说明黄连木叶酚类物质是良好的天然抗氧化剂,具有在食品、医药、化妆品等领域广泛应用的潜力。4、采用LC-MS分析方法对黄连木叶酚类物质成分分析,初步鉴定黄连木叶酚类物质9个成分,其分子式为：C5H8O4、C5H4O6、C7H6O3、C5H12O6、C8H10O6、 C16H32O9、C7H6O2、C21H20O11、C28H24O15,对黄连木叶酚类物质进行波谱表征的结果显示：黄连木叶酚类物质吸收波谱主要集中在200nm到400nm之间,特征吸收波峰是276nm。5、考察了黄连木叶精油提取对联产酚类物质的影响：对酚类物质提取得率和总酚、单宁、总黄酮含量进行比较,并用HPLC方法对主要成分进行分析比较。研究表明,提取精油对黄连木叶酚类物质的提取得率、主要活性成分等没有产生显著影响。因此,进行黄连木叶精油与酚类物质联产基本可行,可以进一步降低生产成本,提高综合利用经济效益。6、采用GC-MS方法对黄连木叶精油成分进行分析,初步鉴定出黄连木叶精油61个成分,其主要成分为：桉叶油醇(5.881%),trans-石竹烯(3.025%),白千层醇(2.759%),十六酸甲酯(2.355%),丙酸香茅酯(1.944%),α-雪松烯(1.671%),α-杜松烯(1.629%),香豆素(1.168%)。对黄连木叶精油进行波谱表征的结果显示：黄连木叶精油吸收波谱主要集中在200nm到400nm之间。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-12
符号说明  12-13
第一章绪论  13-31
  1. 黄连木研究进展  13-18
    1.1 黄连木简介  13-15
    1.2 药用价值研究  15
    1.3 经济价值研究  15-16
    1.4 黄连木种子油脂应用研究  16-17
    1.5 黄连木化学成分及生物活性研究  17-18
  2. 植物多酚研究进展  18-29
    2.1 植物多酚研究  18-22
    2.2 植物活性物提取方法及纯化方法  22-29
  3. 本论文的意义和研究目的  29-30
  4. 本论文的实验技术路线  30-31
第二章黄连木叶粗酚类物质纯化及活性成分检测  31-43
  2.1 实验材料与仪器  31-33
    2.1.1 实验材料  31
    2.1.2 实验试剂  31-32
    2.1.3 实验仪器  32-33
  2.2 实验方法  33-36
    2.2.1 原料预处理  33
    2.2.2 试剂配制和溶液制备  33
    2.2.3 黄连木叶粗酚类物质提取  33
    2.2.4 薄层层析实验  33-34
    2.2.5 黄连木叶粗酚类物质的纯化  34
    2.2.6 总酚含量测定  34
    2.2.7 单宁含量测定  34-35
    2.2.8 总黄酮含量测定  35
    2.2.9 黄连木叶酚类物质的成分分析  35-36
    2.2.10 黄连木叶酚类物质的光谱表征  36
  2.3 实验结果与讨论  36-42
    2.3.1 黄连木叶粗酚类物质提取  36
    2.3.2 薄层层析  36-37
    2.3.3 硅胶柱色谱法纯化黄连木叶粗酚类物质  37
    2.3.4 黄连木叶酚类物质中的总酚含量  37-38
    2.3.5 黄连木叶酚类物质中的单宁含量  38-39
    2.3.6 黄连木叶酚类物质中的总黄酮含量  39-40
    2.3.7 黄连木叶酚类物质的成分鉴定  40
    2.3.8 黄连木叶酚类物质的光谱表征  40-42
  2.4 小结  42-43
第三章黄连木叶酚类物质的离体及线虫活体抗氧化活性研究  43-54
  3.1 实验材料与仪器  43-45
    3.1.1 实验材料  43-44
    3.1.2 实验试剂  44-45
    3.1.3 实验仪器  45
  3.2 实验方法  45-49
    3.2.1 试剂配制和溶液制备  45-47
    3.2.2 秀丽隐杆线虫保存  47
    3.2.3 秀丽隐杆线虫复苏  47
    3.2.4 DPPH法测定黄连木叶酚类物质清除自由基能力  47-48
    3.2.5 FRAP法测定黄连木叶酚类物质抗氧化活性  48
    3.2.6 秀丽隐杆线虫的同步化  48
    3.2.7 黄连木叶酚类物质提高线虫存活率  48-49
    3.2.8 黄连木叶酚类物质对线虫体内ROS的抑制效应  49
  3.3 实验结果与讨论  49-53
    3.3.1 黄连木叶纯化酚类物质清除DPPH自由基的能力  49-50
    3.3.2 FRAP法测定黄连木叶纯化酚类物质抗氧能力  50-51
    3.3.3 黄连木叶纯化酚类物质对线虫存活率的影响  51-52
    3.3.4 黄连木叶纯化酚类物质对线虫体内ROS的抑制效应  52-53
  3.4 小结  53-54
第四章黄连木叶精油和酚类物质联产及成分分析  54-64
  4.1 实验材料与仪器  54-56
    4.1.1 实验材料  54
    4.1.2 实验试剂  54-55
    4.1.3 实验仪器  55-56
  4.2 实验方法  56-58
    4.2.1 原材料预处理  56
    4.2.2 试剂配制和溶液制备  56
    4.2.3 超临界CO_2流体萃取精油  56
    4.2.4 黄连木叶酚类物质的提取方法  56-57
    4.2.5 精油和酚类物质联产技术评价  57
    4.2.6 黄连木叶酚类物质成分分析  57
    4.2.7 黄连木叶精油成分分析  57
    4.2.8 黄连木叶精油光谱表征  57-58
  4.3 实验结果与讨论  58-63
    4.3.1 黄连木叶精油提取  58
    4.3.2 精油和酚类物质联产技术评价  58-59
    4.3.3 黄连木叶精油成分分析  59-62
    4.3.4 黄连木叶精油光谱表征  62-63
  4.4 小结  63-64
第五章结论与展望  64-66
  5.1 结论  64-65
  5.2 展望  65-66
参考文献  66-74
致谢  74-75
攻读硕士学位期间研究成果目录  75

黄连木叶酚类物质的提取鉴定、生物活性及与精油联产的研究

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