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重金属和草甘膦复合污染生态毒理研究

作　者: 周垂帆
导　师: 俞元春
学　校: 南京林业大学
专　业: 水土保持与荒漠化防治
关键词: 草甘膦 铜 镉 明亮发光杆菌 赤子爱胜蚯蚓 复合污染
分类号: X171.5
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


摘要：过去大多数复合污染的研究集中在重金属元素之间，而由于重金属与有机物的性质差异显著，对于重金属-有机污染物之间的复合污染研究相对较少，但重金属-有机污染物的复合污染形式却非常普遍地存在在环境中。除草剂草甘膦，在农业土壤上大量使用，可能对土壤生物造成危害，而环境中草甘膦存在的地方往往重金属含量也很高，如含铜杀菌剂，含镉磷肥，含铜镉的污水灌溉等与除草剂草甘膦在果园、农田等土壤中使用，为两者的共存及复合污染提供了可能，他们的共存可会改变土壤中重金属的环境化学行为和毒性。因为草甘膦中含有羧基、氨基、磷酸基等配位基团对重金属阳离子和有机阳离子有很强的络合能力，能影响重金属的生物有效性、毒性以及重金属在生物体内的积累。本文以除草剂草甘膦（GPS）和重金属铜（Cu）、镉（Cd）为典型的有机物和重金属污染物，对草甘膦与Cu、Cd复合污染生态毒理学生物标记物的筛选和定量表征进行了重点深入的研究，以期为有机物和重金属污染物的研究与诊治提供科学依据，主要研究结果如下:（1）在环境污染物的毒性评价和监测中，发光细菌法是一种具有快速、灵敏和廉价等优点的直接生物测试方法。有毒物质会影响发光菌的呼吸作用、电子传输系统、ATP产生、蛋白质或脂类合成，从而改变发光强度。以明亮发光杆菌T3小种（Photobacteriumphosphorem T3）为例，采用室内模拟实验，研究了Cu、Cd、草甘膦（原药）对发光菌单一，及草甘膦与Cu、Cd的复合的急性毒性效应。实验结果表明，Cu、Cd对发光菌都有很强的毒性，而没有调节pH的草甘膦具有很强的酸性，能够降低溶液pH，对发光菌有很强的毒性。而调节pH后的草甘膦对发光菌无明显毒性，并且能够显著降低重金属Cu、Cd对发光菌的抑制，特别是与Cu复合，随着GPS/Cu摩尔比值的增大而毒性降低，甚至对发光菌无明显抑制。因此本研究认为，在草甘膦和重金属共存的环境中，草甘膦能够降低重金属对发光菌的毒性。（2）采用模拟土壤溶液的方法，研究了Cu、草甘膦（原药）对赤子爱胜蚯蚓（Eisenia fetida）单一，及草甘膦与Cu的复合的48h急性毒性效应。对蚯蚓的死亡、Cu的吸收，和一些生物标记物如超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽含量（GSH）、乙酰胆碱酯酶（AchE）活性进行了测定。蚯蚓的死亡率和体内Cu含量随着溶液中Cu浓度的增加而显著增加，Cu产生毒性的原因主要是自由态的Cu2+，然而本研究没有发现草甘膦对蚯蚓产生显著毒性，有意思的是由于草甘膦的存在，溶液中自由态的Cu2+几乎全部与草甘膦发生络合，显著的降低Cu对蚯蚓的急性毒性，即Cu浓度一定，草甘膦存在的情况下，蚯蚓的死亡率显著降低，体内甚至不再富集Cu。除此之外，蚯蚓的SOD酶活性、GSH含量、AchE酶活性几乎恢复到正常水平。实验结果表明草甘膦能够降低重金属Cu对蚯蚓的急性毒性。（3）采用OECD人工土壤培养方法，研究了Cu和草甘膦以及两者复合对蚯蚓的亚急性毒性效应，将蚯蚓暴露在人工土壤中28d，测定了蚯蚓的体重损失率、产茧量、Cu的吸收动力学、Cu富集量以及一些生物标记物如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶和丙二醛（MDA）。实验结果表明暴露在Cu处理的土壤中，随着Cu浓度的增加，蚯蚓的体重损失增加以及体内金属含量显著增加，随着时间的增加蚯蚓对Cu的吸收达到平衡，不同的是草甘膦对蚯蚓毒性很低，甚至无明显毒害。有趣的是他们复合之后对蚯蚓的毒性显著降低，即Cu一定时，草甘膦的存在蚯蚓体重损失显著降低、产茧量增加、对Cu的富集减少。除此之外Cu所引起的蚯蚓SOD、CAT、MDA的异常都一定程度上缓解。本实验结果表明暴露28天后Cu对蚯蚓产生了很强的毒性，而草甘膦毒性较弱，两者复合后毒性降低表现为颉颃作用。（4）采用模拟土壤溶液的方法，研究草甘膦存在，Cd对赤子爱胜蚯蚓（Eisenia fetida）的48h急性毒性效应。对蚯蚓的死亡、Cd的吸收和生物标记物如超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性进行了测定。蚯蚓的死亡率和体内Cd含量随着溶液中Cd浓度的增加而显著增加，有意思的是草甘膦的存在能够显著的降低Cd对蚯蚓的急性毒性，即Cd浓度一定，草甘膦存在的情况下，随着GPS/Cd摩尔比值的增加蚯蚓的死亡率降低，体内富集Cd量降低。对Cd的亚细胞测定发现Cd主要分布在E（细胞残渣）、H（热稳定组分）、G（热变性组分），而D（细胞器）和F（微粒体含量）很少。草甘膦的添加在各个组分中都一定程度上有所降低，特别是E（细胞残渣）。暴露在Cd处理中引起了蚯蚓的抗氧化酶应激，但草甘膦的存在蚯蚓的SOD酶活性、CAT酶、GSH-Px酶活性显著降低但与对照相比仍然差异显著。实验结果表明草甘膦能够降低重金属Cd对蚯蚓的急性毒性。（5）采用OECD人工土壤培养方法，研究草甘膦存在，Cd对赤子爱胜蚯蚓（Eisenia fetida）的亚急性毒性效应，将蚯蚓暴露在人工土壤中28d，测定了蚯蚓的体重损失率、产茧量、Cd的吸收动力学、Cd富集量、丙二醛（MDA）含量的变化。实验结果表明Cd处理的土壤中，整个实验过程随着时间的增加蚯蚓对Cd的吸收一直增加未达到平衡，28d后，随着Cd浓度的增加，蚯蚓的体重损失增加、产茧量显著降低、以及体内金属含量显著增加，且引起了蚯蚓的脂质过氧化。当Cd一定，草甘膦的存在蚯蚓体重损失显著降低、产茧量增加、对Cd的富集减少。除此之外Cd所引起的蚯蚓脂质过氧化都一定程度上缓解。本实验结果表明暴露28天后Cd对蚯蚓产生了很强的亚急性毒性，而与草甘膦复合后毒性降低表现为颉颃作用。

全文目录


致谢  3-4
摘要  4-6
Abstract  6-12
第一章 文献综述  12-28
  1.1 农田典型重金属污染物的环境行为和生态毒性  12-14
    1.1.1 土壤铜的环境行为和生态毒性  12-13
    1.1.2 土壤镉的环境行为和生态毒性  13-14
  1.2. 农田典型农药草甘膦的环境行为和生态毒性  14-16
    1.2.1 除草剂草甘膦简介  14-15
    1.2.2 草甘膦和重金属的复合污染研究进展  15-16
  1.3 影响土壤重金属生物有效性的因子  16-19
  1.4 蚯蚓生态毒理学的研究进展  19-25
    1.4.1 蚯蚓生态毒理学研究方法  20-22
    1.4.2 蚯蚓生理生化指标的研究  22-25
  1.5 论文的主要研究内容、目的和技术路线  25-28
    1.5.1 研究对象  25
    1.5.2 研究内容及目的  25-27
    1.5.3 技术路线  27-28
第二章 草甘膦和铜镉复合污染对发光菌毒性效应  28-34
  2.1 引言  28
  2.2 材料和方法  28-30
    2.2.1 实验材料  28-29
    2.2.2 发光菌染毒  29
    2.2.3 供试毒物及毒性浓度设计  29
    2.2.4 数据处理及统计  29-30
  2.3 结果与分析  30-33
    2.3.1 草甘膦和铜对发光菌的单一毒性  30-31
    2.3.2 草甘膦和铜复合对发光菌的毒性  31-32
    2.3.3 镉对发光菌的单一毒性  32
    2.3.4 草甘膦和镉复合对发光菌的毒性  32-33
  2.4 讨论  33-34
    2.4.1 草甘膦对发光菌毒性效应  33
    2.4.2 草甘膦存在的情况下铜镉对发光菌毒性效应  33-34
第三章 草甘膦和铜单一与复合污染对蚯蚓的急性毒性效应  34-47
  3.1 引言  34-35
  3.2 材料和方法  35-36
    3.2.1 实验材料  35
    3.2.2 模拟土壤溶液配制  35
    3.2.3 生物实验  35-36
    3.2.4 蚯蚓体中铜的测定  36
    3.2.5 蚯蚓生化指标的测定  36
    3.2.6 数据处理及统计  36
  3.3 结果与分析  36-44
    3.3.1 草甘膦和铜对蚯蚓死亡率的影响  36-37
    3.3.2 草甘膦和铜复合后蚯蚓死亡率的变化  37-38
    3.3.3 草甘膦的存在蚯蚓铜吸收的变化  38-39
    3.3.4 草甘膦与铜复合对蚯蚓生化指标的影响  39-44
  3.4 讨论  44-47
    3.4.1 铜对赤子爱胜蚯蚓的急性毒性效应  44-45
    3.4.2 草甘膦对赤子爱胜蚯蚓的急性毒性效应  45
    3.4.3 草甘膦与重金属铜复合后对赤子爱胜蚯蚓的急性毒性效应  45-47
第四章 草甘膦和铜单一与复合污染对蚯蚓的亚急性毒性效应  47-57
  4.1 引言  47
  4.2 材料与方法  47-49
    4.2.1 化学试剂与受试蚓种  47
    4.2.2 实验方法  47-48
    4.2.3 蚯蚓失重率和产茧的计算  48
    4.2.4 蚯蚓体内铜的测定  48
    4.2.5 蚯蚓生化指标的测定  48
    4.2.6 数据处理及统计  48-49
  4.3 结果与分析  49-54
    4.3.1 草甘膦和铜单一与复合污染对蚯蚓生长繁殖的影响  49-50
    4.3.2 铜和草甘膦单一与复合污染对蚯蚓富集铜的影响  50-52
    4.3.3 铜和草甘膦单一与复合污染对蚯蚓产茧影响  52-53
    4.3.4 铜和草甘膦单一与复合污染对蚯蚓生化指标的影响  53-54
  4.4 讨论  54-57
    4.4.1 铜对蚯蚓的亚急性毒性  54-55
    4.4.2 草甘膦对蚯蚓的亚急性毒性  55
    4.4.3 铜和草甘膦复合污染对蚯蚓的亚急性毒性  55-57
第五章 草甘膦存在的条件下，镉对蚯蚓的急性毒性效应  57-66
  5.1 引言  57
  5.2 材料与方法  57-60
    5.2.1 化学试剂与受试蚓种  57-58
    5.2.2 镉与草甘膦复合对蚯蚓的急性毒性实验  58
    5.2.3 蚯蚓体内镉的亚细胞分布变化  58-59
    5.2.4 蚯蚓生化指标的变化  59
    5.2.5 蚯蚓体内镉的测定  59
    5.2.6 数据处理及统计  59-60
  5.3 结果与分析  60-64
    5.3.1 草甘膦存在条件下镉对蚯蚓死亡率的影响  60
    5.3.2 草甘膦存在条件下蚯蚓富集镉的变化  60-61
    5.3.3 草甘膦存在条件下对蚯蚓镉的亚细胞分布影响  61-62
    5.3.4 草甘膦存在条件下镉对蚯蚓生化指标的影响  62-64
  5.4 讨论  64-66
第六章 草甘膦存在的条件下镉对蚯蚓的亚急性毒性效应  66-74
  6.1 引言  66
  6.2 材料与方法  66-68
    6.2.1 化学试剂与受试蚓种  66
    6.2.2 镉与草甘膦复合对蚯蚓的亚性毒性实验  66-67
    6.2.3 蚯蚓体内镉的测定  67
    6.2.4 蚯蚓生化指标的测定  67
    6.2.5 数据处理及统计  67-68
  6.3 结果与分析  68-72
    6.3.1 草甘膦存在条件下镉对蚯蚓生长繁殖的影响  68-69
    6.3.2 草甘膦存在条件下对蚯蚓富集镉的影响  69-71
    6.3.3 草甘膦存在条件下镉对蚯蚓丙二醛的影响  71-72
  6.4 讨论  72-74
    6.4.1 镉对蚯蚓的亚急性毒性  72-73
    6.4.2 镉和草甘膦复合污染对蚯蚓的亚急性毒性  73-74
第七章 全文总结论与展望  74-76
  7.1 本研究的主要结论  74-75
  7.2 本文的创新点  75
  7.3 论文不足  75
  7.4 研究展望  75-76
参考文献  76-85
图表目录  85-88
附录（个人学术信息）  88-90

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中图分类: > 环境科学、安全科学 > 环境科学基础理论 > 环境生物学 > 生态系统与污染生态学 > 污染生态学
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