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MicroRNA-21通过调控PDCD4及PTEN对DLBCL增殖、侵袭、凋亡的影响

作　者: 顾玲
导　师: 王书奎
学　校: 南京师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: DLBCL microRNA miR-21 PDCD4 PTEN
分类号: Q25
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：miR-21在参与细胞中多种过程,通过抑制靶基因的表达来影响肿瘤的发生发展。在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中,它的作用机制仍不清楚,尚无关于miR-21和DLBCL细胞表型之间关系的报道。本实验旨在研究ABC-型DLBCL中能否通过miR-21对PDCD4及PTEN两种基因的调控来影响肿瘤的增殖、侵袭能力和凋亡。探讨以miR-21作为靶分子,对DLBCL基因治疗的可能性。研究方法：1)采用QRT-PCR比较ABC-type及GCB-type中miR-21的表达水平；2)采用荧光素酶报告实验直接证明PDCD4及PTEN是miR-21靶基因；3)转染OCI-LY3及OCI-LY10后,运用QRT-PCR检测OCI-LY3及OCI-LY10miR-21含量的改变；4)采用QRT-PCR法和Western blot法分别检测转染细胞中PDCD4和PTEN mRNA和蛋白表达的变化；5)采用MTT法检测转染后OCI-LY3、OCI-LY10细胞增殖水平的变化；6)采用Transwell法检测转染后对OCI-LY3、OCI-LY10细胞的体外侵袭能力的影响；7)采用流式细胞术检测转染后对OCI-LY3、OCI-LY10细胞的凋亡的影响；结果：1)QRT-PCR结果表明ABC-型DLBCL中miR-21的表达明显高与GCB-型DLBCL;2)荧光素酶报告实验证明了PDCD4及PTEN是miR-21靶基因；3)QRT-PCR法和Western blot法显示转染后随着细胞中miR-21的量的减少,PDCD4和PTEN的蛋白表达明显降低,但PDCD4和PTEN的nRNA的量变化不明显；4)MTT结果显示,在转染24h、48h、72h和96h后,OCI-LY3/anti-miR-21细胞在48h、72h和96h的增殖能力较OCI-LY3/inhibitor control分别下降至87%(P<0.01),85%(P<0.01),77%(P<0.01)；OCI-LY10/anti-miR-21细胞在48h、72h和96h的增殖能力较OCI-LY10/inhibitor control分别下降至71%(P<0.01),73%(P<0.01),67%(P<0.01)；5)细胞体外侵袭力测定结果显示：OCI-LY3/anti-miR-21及OCI-LY10/anti-miR-21组中穿膜细胞的数目分别是OCI-LY3/inhibitor control及OCI-LY10/inhibitorcontrol组的71%(P<0.05)和60%(P<0.05)6)流式细胞术显示：OCI-LY3/anti-miR-21及OCI-LY10/anti-miR-21组细胞的凋亡显著高于OCI-LY3/inhibitor control及OCI-LY10/inhibitor control组。结论：RNA沉默技术特异性降低OCI-LY3和OCI-LY10细胞miR-21表达后,细胞增殖、侵袭能力受到明显抑制,凋亡增加,说明miR-21能促进OCI-LY3和OCI-LY10细胞的生长。说明miR-21与DLBCL的进展相关,可能为一种新的DLBCL治疗靶分子。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-8
第一章 前言  8-13
  1 microRNA的研究进展  8-12
  2 本试验研究内容  12-13
第二章 试验部分  13-41
  第一节 细胞培养、荧光素酶报告实验及转染  13-33
    1 材料与方法  13-28
    2 结果与分析  28-31
    3 讨论  31-33
  第二节 抑制miR-21对DLBCL生物学行为的影响  33-41
    1 材料与方法  33-36
    2 结果与分析  36-39
    3 讨论  39-41
参考文献  41-46
全文总结  46-47
在读期间发表的学术论文与研究成果  47-48
致谢  48

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中图分类: > 生物科学 > 细胞生物学 > 细胞生理学
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