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虎仗苷抑制UVB对皮肤细胞的损伤及机制研究

作　者: 卓金士
导　师: 卢涛；陈虹
学　校: 河北联合大学
专　业: 皮肤性病学
关键词: 虎仗苷 UVB 氧自由基光老化
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 17次
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内容摘要

虎仗苷为蓼科植物虎杖的根茎提取物,具有镇咳,平喘,抗菌,清除自由基,调血脂,降低胆固醇;对金黄色葡萄球菌、卡他球菌、甲型或乙型链球菌、大肠杆菌等有抑制作用。国内外未见其对皮肤紫外线损伤防护作用研究。本课题拟建立中波紫外线(UVB)照射的人永生化上皮角质形成细胞(HaCaT细胞)损伤模型,并探索虎仗苷对皮肤细胞的紫外线损伤有无防护作用,若有防护损伤则探讨其保护机制。目的建立UVB照射的HaCaT细胞损伤模型,并初步研究虎仗苷对HaCaT细胞的保护机制。方法1体外UVB损伤皮肤细胞模型制作:培养HaCaT细胞,用不同剂量UVB照射细胞,体外通过MTT检测,摸索合适的照射损伤剂量。2药物保护作用的测定:实验设计分为:UVB照射+不同浓度的虎仗苷(0.01mol/L~10μmol/L)、UVB照射组、空白对照。用MTT测定细胞生存率。3采用了酶化学法测定虎仗苷对UVB损伤模型中的抗氧化物:酶超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量影响;脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量影响。4利用NaOH法测定虎仗苷对人黑色素瘤细胞(A375)中酪氨酸酶活性及黑色素含量的影响。5采用DCFH-DA法测定虎仗苷对UVB损伤模型中氧自由基(ROS)的影响。6用RT-PCR测定虎仗苷对UVB损伤模型中p53、bax、caspase-3、MMP-1, IL-6、IL-18 mRNA影响。结果1 UVB损伤模型的制作:在通过检测发现,少量紫外线照射对HaCaT细胞的正常生理功能并无影响,当紫外线照射强度达到一定强度后,细胞的生存率明显降低,而且随着照射强度的增加而减小。根据UVB照射强度和细胞生存率的不同,选定以照射强度为30mJ/cm2制造UVB损伤模型。2虎仗苷对UVB损伤模型的保护:研究发现虎仗苷抑制UVB对HaCaT细胞的损伤,与对照组相比,有统计学意义。3虎仗苷对UVB损伤模型中的SOD,GSH-Px及MDA的影响:结果显示虎仗苷可提高UVB损伤模型中的抗氧化物酶含量,降低脂质过氧化物MDA的含量,与对照组相比,差异有统计学意义。4虎仗苷对A375细胞中酪氨酸酶活性及黑色素含量的影响:结果表明虎仗苷可以降低A375细胞中酪氨酸酶含量,测定虎仗苷对A375细胞黑色素生成,结果表明虎仗苷可以降低A375细胞中黑色素生成,与对照组相比,差异有统计学意义。5虎仗苷对UVB损伤模型中ROS的变化:结果表明虎仗苷可抑制UVB损伤模型中ROS的增多,且ROS生成量随着虎仗苷浓度的增大而减少。以DCFH-DA作用于UVB损伤模型,通过激光共聚焦观察UVB损伤模型细胞荧光变化,结果表明虎仗苷可以降低UVB损伤模型中电子的外泄,与对照组相比,有统计学意义。6虎仗苷对UVB损伤模型中p53、bax、caspase-3、MMP-1, IL-6、IL-18 mRNA的影响:结果表明虎仗苷可以降低UVB损伤模型中p53、caspase-3、MMP-1、IL-6、IL-18 mRNA表达,且具有一定的浓度关系,与对照组相比,差异有统计学意义。结论虎仗苷在体外可以抑制UVB对HaCaT细胞的氧化损伤,提高了UVB损伤模型中抗氧化物酶SOD和GSH-Px的含量,降低了脂质过氧化物MDA的产生,减少了UVB损伤模型中ROS含量,可有效抑制紫外线损伤。虎仗苷降低了UVB损伤模型中凋亡基因和炎症基因的表达,如降低了p53,caspase-3,bax mRNA的表达,抑制了IL-6,IL-18等炎症基因的表达,同时还降低了基质金属蛋白酶MMP-1的表达。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
英文缩写  10-11
前言  11-13
材料与方法  13-29
结果  29-32
附图  32-44
附表  44-50
讨论  50-54
结论  54-55
参考文献  55-61
综述皮肤光老化研究进展  61-70
  参考文献  67-70
致谢  70-71
个人简历  71

虎仗苷抑制UVB对皮肤细胞的损伤及机制研究

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