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TLR2介导的小鼠小胶质细胞抗HCV免疫应答初探

作　者: 杨娟
导　师: 王振海
学　校: 宁夏医科大学
专　业: 神经病学
关键词: 丙型肝炎病毒 toll样受体2 BV-2 肿瘤坏死因子α 干扰素α 单核细胞趋化蛋白1 白介素6 白介素12
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的观察HCV阳性血清处理后BV-2细胞TLR2 mRNA及蛋白的表达,以及TLR2介导的细胞因子TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表达,初步探讨中枢神经系统小鼠小胶质细胞BV-2对HCV阳性血清刺激的免疫反应,为进一步探讨TLR2在中枢神经系统HCV感染发病机制及组织损伤中的作用奠定基础。方法细胞分为空白对照组、正常对照组及实验组,分别给予常规培养用DMEM高糖培养液、含有200mL/L正常血清的DMEM高糖培养液及含有200mL/L HCV阳性血清的DMEM高糖培养液,采用RT-qPCR方法和FCM方法分别检测各组处理后4 h、8 h、16 h及24 h BV-2细胞TLR2 mRNA及蛋白的表达变化,并应用ELISA方法检测各组细胞培养上清液中TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表达;同时设TLR2阻断组及其对照组,首先均给予BV-2细胞TLR2单克隆阻断抗体孵育30 min后分别给予含有200mL/L HCV阳性血清的DMEM高糖培养液及200mL/L正常血清的DMEM高糖培养液培养,24 h后收集上清液应用ELISA方法检测TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表达。所有数据均采用SPSS 13.0统计软件进行分析,组间和组内比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD分析,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果HCV阳性血清处理后BV-2细胞TLR2 mRNA的表达显著升高,其4 h、8 h、16 h及24 h与空白及正常血清对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),空白对照组与正常血清对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);正常BV-2细胞使用PE标记的TLR2单克隆抗体同型对照抗体标记后形成荧光峰值,实验组各时间点BV-2细胞使用PE标记的TLR2单克隆抗体标记未形成荧光峰值;HCV阳性血清处理后BV-2细胞培养上清液中TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表达水平不同,均有不同程度升高,分别与相应的对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05),TLR2蛋白阻断后细胞因子TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12的表达均有不同程度的下降,分别与其对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),TLR2阻断对照组与24 h(-)比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论BV-2细胞存在TLR2表达,HCV阳性血清处理可引起BV-2细胞形态发生改变,且TLR2 mRNA表达及细胞因子表达发生变化,提示HCV阳性血清处理可能激活小胶质细胞TLR2,并介导大量细胞因子的释放,TLR2可能通过下游大量炎性细胞因子如TNF-α、IFN-α、MCP-1、IL-6、IL-12等机制介导BV-2抗HCV免疫及中枢神经系统HCV可能的发病及损伤机制。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
前言  11-13
第一章 HCV 阳性血清处理后BV-2 细胞TLR2 的表达  13-26
  1 材料和方法  13-19
  2 结果  19-23
  3 讨论  23-25
  4 结论  25-26
第二章 TLR2介导的细胞因子的表达  26-41
  1 材料和方法  26-32
  2 结果  32-36
  3 讨论  36-40
  4 结论  40-41
参考文献  41-45
文献综述一  45-55
  参考文献  51-55
文献综述二  55-64
  参考文献  62-64
致谢  64-65
攻读学位期间发表的学术论文  65

TLR2介导的小鼠小胶质细胞抗HCV免疫应答初探

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