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急性髓细胞白血病患者NPM1及FLT3-ITD基因突变的检测及临床意义

作　者: 陈建兰
导　师: 李庆山
学　校: 广州医学院
专　业: 血液内科
关键词: NPM1 FLT3-ITD 急性髓细胞白血病 基因突变
分类号: R733.71
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:建立高分辨熔解曲线(HRM)定性检测初诊急性髓细胞白血病(AML)患者NPM1基因突变和建立变性高效液相色谱(DHPLC)技术相对定量检测初诊AML患者FLT3-ITD基因突变的方法及分析突变患者的临床信息,初步探讨NPM1及FLT3-ITD基因突变与AML临床特征的关系,为AML的临床分层治疗、分子靶向治疗及预后判断提供参考指标。方法:1.采用聚合酶链反应(PCR)结合HRM、PCR结合毛细管电泳(CE)技术、测序方法对103例AML患者进行NPM1基因突变检测,对比验证PCR结合HRM技术检测NPM1基因突变的特异性和灵敏度。2.用PCR结合DHPLC技术相对定量检测103例AML患者FLT3-ITD等位基因突变的情况,并与CE检测突变的结果比对,进行该方法的有效性检验,最后测序验证突变存在情况。3.对103例初诊AML中可获得资料的86例患者NPM1、FLT3-ITD基因突变检测结果和临床资料进行分析,讨论NPM1、FLT3-ITD基因突变患者的一般临床特征、白血病免疫分型、核型分析、临床疗效和预后特点。结果:1.成功建立PCR结合HRM技术检测AML患者NPM1基因突变,特异性和灵敏度均达100%。阳性发现与测序结果吻合。2.成功建立PCR结合DHPLC技术相对定量检测AML患者FLT3-ITD基因突变,定量结果与CE技术定量结果相比无统计学差异。阳性率与测序验证吻合。3.103例AML患者中,31例(30.1%)患者检出NPM1基因突变。获得临床资料的86例患者,发现正常核型AML患者,NPM1基因突变的检出率为47.6%。共发现A、B、D三种NPM1基因突变类型。4.103例AML患者中,20例(19.4%)患者检出FLT3-ITD基因突变。20例突变患者中低比例突变6例,中等比例突变8例,高比例突变6例。测序验证并发现FLT3-ITD突变基因插入片断大小为12bp-107bp不等,均为单个插入片断。获得临床资料的86例患者,正常核型AML患者FLT3-ITD突变的检出率为26.2%。5.NPM1突变患者外周血高白细胞显著高于野生型患者(中位数21.4×109/L vs 8.4×109/L,P=0.034),在免疫分型上与CD34低表达相关(P=0.022)。FLT3-ITD突变组患者外周血白细胞高于野生型患者(中位数23.1×109/L vs 9.5×109/L,P=0.037),突变型骨髓原始细胞比例高于野生型(中位数0.76 vs 0.4,P=0.023),在免疫分型上也与CD7高表达相关(P=0.024)。6.NPM1突变组与野生组的完全缓解率(CR)相比无统计学差异(P=0.883),第一疗程化疗完全缓解率(CR1)之间相比有统计学差异性(P=0.042)。FLT3-ITD突变组与野生组的CR、CR1分别相比无统计学差异性(P=0.43,P=0.072)。7.NPM1-/FLT3-ITD-、NPM1+/FLT3-ITD-、NPM1-/FLT3-ITD+、NPM1+/FLT3-ITD+四组所占比例为57.0%、23.3%、12.8%和6.9%,CR率分别为81.6%、85%、54.5%及66.6%,一年内RR为42.5%、17.6%、50%、25%,NPM1+/FLT3-ITD-组CR率最高,一年内RR最低。NPM1-/FLT3-ITD+组CR率最低,一年内RR最高。结论:PCR结合HRM可快速准确检测AML患者NPM1基因突变,PCR结合DHPLC可准确定量检测AML患者FLT3-ITD基因突变情况。NPM1和FLT3-ITD基因突变患者有着特殊的临床特征。NPM1+/FLT3-ITD-预后最好,NPM1-/FLT3-ITD+预后最差。NPM1突变和FLT3-ITD突变可作为AML的分层治疗中可作为判断预后的独立指标之一。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-9
缩略词表(Abbreviation)  9-10
前言  10-14
第一部分 应用高分辨熔解曲线技术检测 AML 患者 NPM1 基因突变  14-25
  研究对象及材料  14-16
  实验方法及步骤  16-19
  结果  19-22
  讨论  22-25
第二部分 应用变性高效液相色谱技术定量检测 AML 患者 FLT3-ITD 基因突变  25-33
  研究对象及材料  25-26
  研究方法  26-28
  结果  28-30
  讨论  30-33
第三部分 AML 患者 NPM1 与 FLT3-ITD 基因突变 检测的临床意义  33-42
  前言  33-34
  研究对象材料、方法  34-36
  结果  36-39
  讨论  39-42
小结  42
展望  42-43
参考文献  43-52
综述  52-59
  参考文献  56-59
致谢  59-61

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病 > 急性白血病
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