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IL-6在运动性骨骼肌慢性损伤中的表达及伤科外用药对其影响的研究

作　者: 牛文玉
导　师: 陈佑学
学　校: 首都体育学院
专　业: 运动人体科学
关键词: 骨骼肌 IL-6 外用贴药修复运动性损伤
分类号: R873
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

研究目的通过观察骨骼肌细胞中IL-6（白介素-6）在运动性慢性骨骼肌组织损伤中的表达，对比不同给药下骨骼肌细胞中IL-6表达的变化，并结合骨骼肌细胞病理组织形态的改变，来分析骨骼肌细胞中IL-6在运动性慢性肌组织损伤中的表达特点以及外用伤科药对运动性骨骼肌慢性损伤中肌细胞IL-6表达的影响，探讨骨骼肌细胞中IL-6在运动性慢性肌组织损伤修复中所发挥的作用。研究方法本研究采用体重在2.2.kg-2.5kg成年雄性新西兰兔作为实验对象，随机分为空白对照组（0W）和实验组：空白对照组5只；实验组分别分为实验2周组（2W）、实验3周组（3W）、实验4周组（4W）、实验5组周（5W），其中，实验2周组5只作为造模组；实验3周组(n=28)分为：3W消痛贴组（n=7）、3W扶他林组（n=7）、3W安慰剂组（n=7）和3W训练对照组（n=7）；实验4周(n=28)组分为：4W消痛贴组（n=7）、4W扶他林组（n=7）、4W安慰剂组（n=7）和4W训练对照组（n=7）；实验5周(n=27)分为：5W消痛贴组（n=7）、5W扶他林组（n=6）、5W安慰剂组（n=7）和5W训练对照组（n=7）。实验组动物采用高电压低电流刺激仪刺激，使其产生主动的跑跳运动，训练方案：0.1-0.2s/次（每两次间隔12s）,20min/组（两组间歇20min），3组/天，5天/周。训练结束后分别给（3W、4W、5W）扶他林组、消痛贴组、安慰剂组以不同的外用药。空白对照组在笼内标准饲养；实验组各组在相应的训练周（2、3、4、5）完成后取左腿腓肠肌内侧头，用4%多聚甲醛固定液保存，进行常规HE染色和免疫组化处理，采用奥林巴斯数码光学显微镜观察对比各组肌组织形态学变化，对免疫组化图像进行拍照，采用D3.2图像软件处理免疫组化图片，计算肌细胞中IL-6表达的平均光密度值，所得数据PASWstatistics18.0软件对所得数据进行处理，对肌细胞IL-6进行半定量分析。研究结果1.HE染色观察：空白对照组肌细胞排列整齐、紧凑，大小不均，外形呈多边形或似原形；细胞质染色均匀；未见明显的炎性细胞浸润，无肌纤维变性、无血管淤血、增生、无结缔组织增生等情况现象。2W训练对照组出现炎性细胞浸润灶，细胞核肿胀，细胞间隙开始变得模糊不清，细胞肿胀呈圆形，炎性细胞较多在细胞间，细胞坏死发生空泡样改变，炎性细胞侵入坏死细胞内；3、4周组炎性细胞浸润灶、坏死细胞增多，出现细胞核固缩；5周组炎性细胞浸润灶、坏死细胞相对较3、4周组少。横向看，与其它各组比，外用贴药组炎性细胞浸润、细胞坏死程度相对较轻；2.免疫组化观察：空白对照组：有少量IL-6的表达；2W训练组IL-6表达较多，多呈弥漫状分布于细胞质；其余各组均有不同程度的表达。3W训练组IL-6的平均光密度值最高，其它各组显著低于2W训练组(P<0.01)；3周组和4周组IL-6平均观密度值无明显差异，基本上与空白对照组相持平；与4W消痛贴组、4W扶他林组相比较，5W消痛贴组、5W扶他林组IL-6的平均光密度值显著提高（p<0.05）；与4W训练对照组、4W安慰剂组、5W安慰剂组比较，5W训练对照组、5W安慰剂组IL-6平均光密度值无显著性差异。研究结论1.运动性骨骼肌慢性损伤可诱导骨骼肌细胞产生IL-6，在训练强度、方式不变的前提下，肌细胞IL-6的表达逐渐对损伤产生适应性，随着训练时间的延长，训练3周后肌细胞IL-6回落到训练前的水平，并会延续1周，到第五周时开始出现第二次升高趋势。2.在运动性骨骼肌慢性损伤中，消痛贴外用对运动性骨骼肌慢性损伤有着较为明显的疗效，但与肌细胞IL-6表达的变化关系不大，提示外用消痛贴可能是通过其他途径影响着肌组织损伤的修复过程，或者可以考虑增加药量、运动量做进一步的研究。

全文目录

中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
1 前言  9-10
  1.1 选题依据（意义、目的）  9-10
  1.2 研究任务  10
2 文献综述  10-19
  2.1 骨骼肌运动性损伤概述  10-11
  2.2 动物骨骼肌运动性损伤模型的建立  11-12
  2.3 动物实验模型中骨骼肌运动性损伤的过程及评定  12-14
  2.4 骨骼肌运动性损伤的修复  14-16
    2.4.1 肌卫星细胞与肌骨骼肌再生  14-15
    2.4.2 细胞因子与骨骼肌再生  15-16
    2.4.3 运动性骨骼肌损伤修复的干预手段以相关因素  16
  2.5 IL-6 与运动关系的研究进展  16-18
    2.5.1 IL-6 的释放  16-17
    2.5.2 不同运动强度后血清中 IL-6 的时相变化  17
    2.5.3 肌细胞运动性损伤的炎性反应与 IL-6  17-18
  2.6 外用奇正消痛贴的研究进展  18-19
3 研究对象与方法  19-24
  3.1 实验动物及分组  19-20
  3.2 实验动物饲养  20
  3.3 实验仪器及试剂  20-21
    3.3.1 实验仪器  20
    3.3.2 主要试剂  20-21
  3.4 研究方法  21-24
    3.4.1 实验造模  21-22
      3.4.1.1 动物训练  21
      3.4.1.2 动物给药  21-22
    3.4.2 动物取材  22
    3.4.3 组织脱水、包埋、切片  22-23
    3.4.4 HE 染色  23
    3.4.5 光学镜观察肌肉组织，并拍照  23
    3.4.6 免疫组化标本制作  23-24
    3.4.7 免疫组化图像观察  24
    3.4.8 免疫组织化学图像分析  24
    3.4.9 数据处理  24
4 研究结果  24-33
  4.1 HE 染色观察（光镜）  24-26
  4.2 免疫组化观察  26
  4.3 骨骼肌细胞 IL-6 免疫组织化学图像分析  26-33
    4.3.1 纵向比较训练对照组肌细胞 IL-6 的平均光密度值变化  26-27
    4.3.2 纵向比较安慰剂组肌细胞 IL-6 的平均光密度值变化  27-28
    4.3.3 纵向比较扶他林组肌细胞 IL-6 的平均光密度值变化  28-29
    4.3.4 纵向比较消痛贴组肌细胞 IL-6 的平均光密度值变化  29-30
    4.3.5 各组纵向比较统计图  30
    4.3.6 横向比较 3W 各组肌组织中 IL-6 平均光密度值的变化  30-31
    4.3.7 横向比较 4W 组各组肌细胞 IL-6 平均光密度值的变化  31-32
    4.3.8 横向比较 5W 组各组肌细胞 IL-6 平均光密度值的变化  32-33
5 分析与讨论  33-39
  5.1 训练周数的延长对骨骼肌形态学（HE 染色）变化的影响  34-35
  5.2 运动性骨骼肌慢性损伤中肌细胞 IL-6 表达的时相变化  35-37
    5.2.1 骨骼肌 IL-6 在不同运动周数中的表达特点  35-36
    5.2.2 运动性骨骼肌损伤中肌细胞 IL-6 变化的原因探析  36-37
  5.3 不同外用药对骨骼肌形态学变化的影响  37-38
  5.4 不同外用药对运动性骨骼肌慢性损伤中肌细胞 IL-6 的表达影响  38-39
6 结论  39-40
参考文献  40-46
致谢  46-47
附图  47-62

IL-6在运动性骨骼肌慢性损伤中的表达及伤科外用药对其影响的研究

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