|
背景和目的变应性鼻炎(allergic rhinitis, AR)是一种由易感个体接触致敏变应原后由IgE抗体参与、以肥大细胞释放介质(主要是组胺等)为开端、有多种免疫活性细胞和细胞因子等共同作用的鼻黏膜慢性炎症性疾病。二十余年前,在大量的实验基础上,Ciprandi G提出了变应性鼻炎最轻持续炎症反应期(allergic rhinitis minimal persistent inflammation, AR-MPI)的概念,指出当变应原剂量较低时,即使患者无AR的症状表现,但鼻黏膜已经发生炎症反应,并提出预防性治疗的新方案,推测在症状未发作前给予药物治疗,将会改善患者生活质量,减少并发症的发生。虽然此举当时并未得到广泛的认同,却给人们治疗AR以启迪,AR预防性治疗的相关研究从未间断。AR-MPI动物模型的成功建立为这一研究带来新的契机。本文通过检测提前4w、2w、1w使用鼻用糖皮质激素预防治疗豚鼠AR-MPI模型后鼻黏膜病理性改变及STAT6、IL-4的表达情况,以探讨不同用药时间预防治疗AR的疗效。方法健康Hartley系豚鼠120只,雌雄不限,体重200g-300g,随机分为6组：A组(空白对照组),B组(AR无干预组),C组(AR-MPI期无干预组),D组(AR-MPI期糖皮质激素提前1周治疗组),E组(AR-MPI期糖皮质激素提前2周治疗组),F组(AR-MPI期糖皮质激素提前4周治疗组),每组20只。B、C、D、E、F组用卵清蛋白(OVA)行基础致敏、强化致敏,继之鼻腔局部激发,建立豚鼠AR模型后,B组继续以1%OVA激发,C、D、E、F组改为0.01%OVA鼻腔局部激发,建立AR-MPI模型。对照组用生理盐水代替OVA进行实验。D、E、F组为AR-MPI模型丙酸氟替卡松鼻喷雾剂(fluticasone propionate nasal spray, FP)预防治疗组,动物建模后FP(50微克\侧\次)治疗,每天2次,分别治疗1w、2w、4w,用药结束后1%OVA鼻腔激发。观察豚鼠的行为学变化,最后一次鼻腔激发后处死动物取所有豚鼠的鼻黏膜,观察HE染色情况,应用免疫组织化学技术检测STAT6、IL-4在各组豚鼠鼻黏膜中的表达。结果1动物的行为学观察采用叠加量化记分法评价豚鼠模型,总分>5表示建模成功,症状减轻结合鼻黏膜病理学改变判定AR-MPI模型成功。不同时间药物治疗,1%OVA鼻腔攻击后,A、E、F均无典型的AR表现,B、C、D组均出现较典型的AR症状,A、E、F组间比较无统计学差异(P>0.05),B、C、D组组间无差异(P>0.05),A、E、F组与B、C、D组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。2鼻黏膜组织病理检测结果建模结束后,比较各组豚鼠鼻黏膜嗜酸粒细胞(EOS)计数,A组偶见EOS,B组EOS明显浸润,与A组相比差异有统计学意义(P<0.05)；C、D、E、F组EOS轻微浸润,与A、B组相比差异均有统计学意义(P<0.05),模型建立成功。FP预防治疗,1%OVA鼻腔局部攻击后,A组豚鼠鼻黏膜较前无明显改变,B组鼻黏膜出现更严重的组织重塑, C、 D组均有EOS大量浸润,E、F组上皮基本完整、偶见炎症细胞浸润,B组与余组均有差异(P<0.05),A、E、F组间无差异(P>0.05),C、D组组间无差异(P>0.05),A、C、D组组间有差异(P<0.05)。3STAT6、IL-4免疫组化检测在正常和AR豚鼠鼻黏膜中均可检测到STAT6、IL-4,其分布基本一致,主要集中在下鼻甲粘膜及鼻中隔犁氏区粘膜上皮细胞胞膜和胞质中；建模后,STAT6、IL-4的表达情况(平均灰度值比较)为：A组少见棕黄色颗粒；B组棕黄色颗粒较多且成团分布；C、D、E、F组棕黄色颗粒弥漫分布,组间比较无统计学意义(P>0.05)；A组、B组分别与C、D、E、F组比较,均有统计学意义(p<0.05)；FP治疗,1%OVA鼻腔再攻击后,STAT6、IL-4的表达情况(平均灰度值比较)为： A组同前,B组几乎全部被染成棕黄色颗粒,C、D组棕黄色颗粒较多,成团分布,E组、F组可零星见到棕黄色颗粒,比较灰度值,B组与余组均有差异(p<0.05),A、E、F组间无差异(P>0.05),C、D组组间无差异(P>0.05),A、C、D组组间有差异(P<0.05)。以B组为例,AR模型建成后,比较STAT6、IL-4的灰度值,二者具有显著相关性(r=0.960,p<0.05)。结论1STAT6、IL-4在正常与AR豚鼠中均有表达,且两者具有相关性；STAT6可以作为判断AR严重程度的指标。2FP可以下调STAT6、IL-4等因子的表达水平,这可能是鼻用糖皮质激素治疗AR机理之一。3预防治疗AR模型豚鼠,提前2W应用鼻用糖皮质激素可缓解发作后1W的炎症反应。
|