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豚鼠耳颞部~(60)Coγ射线照射后对耳蜗核影响的实验研究

作　者: 钟华林
导　师: 唐安洲
学　校: 广西医科大学
专　业: 耳鼻咽喉头颈外科学
关键词: 60钴γ 射线照射耳蜗核半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 感音神经性耳聋 Bax Bcl-2
分类号: R764
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：鼻咽癌是我国南方比较常见的恶性肿瘤之一,广西鼻咽癌发病率在全国排第二,占头颈部肿瘤发病率的首位,放射治疗是目前鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)等头颈部恶性肿瘤的主要治疗手段之一。感音神经性耳聋(sensorineurial hearing loss, SNHL)是鼻咽癌(NPC)放疗后常见的并发症,其发病机理尚未明确,目前多数学者认为放疗后感音神经性耳聋与射线引起的耳蜗损伤有关。由于在鼻咽癌放射治疗中,患者的内耳、听神经、脑干等听觉器官均不可避免地受到照射,放疗后感音神经性耳聋除与耳蜗的损伤有关外,是否也与蜗神经核损伤有关,目前尚未见相关报道。本研究以豚鼠为动物模型,用60Coγ射线对豚鼠耳颞部进行照射。通过观察对放疗后ABR和蜗神经核形态学改变以及与凋亡密切相关蛋白在蜗神经核中的表达,初步探讨60Co照射引起蜗神经核损伤及其形态学改变,为放疗后感音神经性聋中枢病变提供实验依据。方法：选用48只健康白色红目豚鼠,随机分为正常对照组(8只)与实验组(40只),对照组是未进行照射的健康豚鼠,实验组40只豚鼠一次性给予耳颞部40Gy60Co Y射线照射,并于60Co照射后1天,4天,7天,14天,30天行听性脑干反应(auditory brainstem response, ABR)检查后立即处死,4%多聚甲醛溶液心脏灌流固定后取出耳蜗核,行HE观察耳蜗组织的形态学病理变化和行免疫组织化学法检测凋亡蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cysteine-containing aspartate specific proteases, Caspase-3), Bax, Bcl-2的表达。结果：1.大体标本观察：40Gy剂量60Coγ射线照射后第1天、第4天、第7天、第14天豚鼠听泡内无明显积液及脓性分泌物,照射后30天部分豚鼠(2只)听泡内出现积液。2.ABR各波潜伏期及反应阈值：照射后第1天ABR阈值(31.88±2.59dB SPL)比对照组(29.17±1.95dB dB SPL)高,但比较差异无统计学意义(p>0.05),照射后第4天ABR阈值(35.00±3.17dB SPL)、第7天ABR阈值(35.83±2.04dB SPL)、第14天ABR阈值(39.17±2.05dB SPL)、第30天ABR阈值(41.67±2.58dB SPL)、与对照组比较差异有统计学意义(p<0.05)。照射后第1天ABR I波潜伏期(1.27±0.09ms)、第4天Ⅰ波潜伏期(1.29±0.02ms)、第7天工波潜伏期(1.32±0.16ms)、第14天I波潜伏期(1.38±0.05ms)、第30天Ⅰ波潜伏期(1.44±0.06ms)、与对照组(1.21±0.04ms)比较差异有统计学意义(p<0.05)。照射后第1天ABR Ⅱ波潜伏期(2.07±0.15ms)、第4天Ⅱ波潜伏期(2.10±0.05ms)、第7天Ⅱ波潜伏期(2.14±0.03ms)、第14天Ⅱ波潜伏期(2.21±0.07ms)、第30天Ⅱ波潜伏期(2.33±0.09ms)、与对照组(1.96±0.07ms)比较差异有统计学意义(p<0.05)。照射后第1天ABR Ⅲ波潜伏期(2.87±0.21ms)、第4天Ⅲ波潜伏期(2.90±0.05ms)、第7天Ⅲ波潜伏期(2.92±0.06ms)、第14天Ⅲ波潜伏期(3.02±0.1lms)、第30天Ⅲ波潜伏期(3.17±0.19ms)、与对照组(2.67±0.06ms)比较差异有统计学意义(p<0.05)。照射后第1天ABR Ⅰ～Ⅱ波峰间期(0.79±0.05ms)、第4天(0.81±0.04ms)、第7天(0.82±0.02ms)第14天(0.83±0.03ms)、第30天(0.88±0.04ms)、与对照组(0.74±0.04ms)比较差异有统计学意义(p<0.05)。照射后第1天ABRⅡⅢ波峰间期(0.80±0.07ms)、第4天(0.80±0.02ms)、第7天(0.80+0.04ms)、第14天(0.81+0.04ms)、第30天(0.84±0.02ms)、与对照组(0.70+0.07ms)比较差异有统计学意义(p<0.05)。照射后第1天ABR Ⅰ～Ⅲ波峰间期(1.60±0.12ms)第4天Ⅰ～Ⅲ波峰间期(1.61±0.04ms)、第7天Ⅰ～Ⅲ波峰间期(1.61±0.05ms)、第14天Ⅰ～Ⅲ波峰间期(1.64±0.07ms)第30天Ⅰ～Ⅲ波峰间期(1.72±0.16ms)、与对照组Ⅰ～Ⅲ波峰间期(1.45±0.05ms)比较差异有统计学意义(p<0.05)。3.HE染色及尼氏染色结果显示：在光学显微镜下见正常对照组豚鼠耳蜗核神经细胞数目较多,染色也较均匀,胞浆丰富,尼氏体正常,胞核和胞浆未见有无明显皱缩和空泡样改变,胶质细胞正常。实验组豚鼠耳蜗核在60Co照射后1d,4d,7d,其神经元细胞数目及染色改变不明显,但是60Co照射后14天出现神经细胞肿胀,胞浆减少着色浅淡,胞核皱缩,尼氏体减少,胶质细胞增生,数量增多,60Co照射后30天以上改变更加明显。4.免疫组织化学染色结果显示：Caspase-3免疫组化阳性结果是耳蜗核神经元胞浆棕黄色染色,对照组豚鼠耳蜗核神经元未见明显阳性表达,实验组豚鼠耳蜗核神经元Caspase-3阳性表达,照射后第1天耳蜗核神经元的Caspase-3灰度值(136.37±24.42)、照射后第4天(94.67±15.33)、第7天(91.40±11.71)、第14天(110.80±4.23)、第30天(123.56±32.56*)与对照组(172.33±17.81)比较差异有显著性统计学意义(p<0.01)；Bax免疫组化阳性表达为耳蜗核神经元胞浆棕黄色染色,对照组豚鼠耳蜗核神经元有少量阳性表达,实验组豚鼠耳蜗核神经元Bax呈现较强阳性表达,照射后第1天耳蜗核神经元的Bax灰度值(128.10±4.89)、照射后第4天(77.85±6.08)、第7天(104.48±11.12)、第14天(109.65±7.55)、第30天(123.56±32.56)与对照组(164.18±1.52)比较差异有显著性统计学意义(p<0.01)；Bcl-2免疫组化阳性表达为耳蜗核神经元胞浆棕黄色染色,对照组豚鼠耳蜗核神经元Bcl-2呈现较强阳性表达,实验组豚鼠耳蜗核神经元阳性表达减弱,照射后第1天耳蜗核神经元的Bcl-2灰度值(117.77±4.62)、照射后第4天(157.30±9.50)、第7天(95.64±5.54)、第14天(102.97±3.57)、第30天(104.99±3.33)与对照组(74.73±7.64)比较差异有显著性统计学意义(p<0.01)。小结：1.40Gy的60Coγ射线照射豚鼠耳颞部后,可以引起听力及耳蜗核组织结构的损伤,随着照射后观察时间的延长,其损害更明显,成功地建立了60Coγ射线照射后耳蜗核损伤模型。2.60Co γ射线照射后可引起细胞凋亡蛋白Caspase-3、Bax表达上调,Bcl-2表达下调,可能参与耳蜗核神经元放疗损伤过程。3.60Co照射后耳蜗核神经元在光学显微镜下形态学改变可能迟于ABR及分子生物学的改变。

全文目录

英文缩写  4-5
摘要  5-10
ABSTRACT  10-17
前言  17-20
材料与方法  20-28
结果  28-32
讨论  32-43
小结  43-44
参考文献  44-49
综述  49-65
  参考文献  59-65
致谢  65

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