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转化生长因子β1与基质金属蛋白酶-9在实验性鼓室硬化中的表达

作　者: 郭文涛
导　师: 樊兆民
学　校: 山东大学
专　业: 临床医学
关键词: 鼓室硬化转化生长因子β1 基质金属蛋白酶-9 病理机制
分类号: R764.29
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

鼓室硬化(tympanosclerosis)是长期中耳炎症消退后所遗留的中耳结缔组织退行性病变,多表现为进行性听力减退,病程较长,可伴有耳鸣等其他症状,纯音测听检查多呈传导性聋。其病因至今尚不明确,一般认为鼓室硬化常伴随中耳疾病如急性中耳炎、慢性中耳炎、化脓性中耳炎和渗出性中耳炎等的反复感染而发生发展,而肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌等是中耳炎症疾病常见的致病菌。近年来,对器官硬化发生机制的研究表明,尽管各组织和器官硬化的发生机制有所差异,却有着共同的特征：以各种原因(炎症、免疫、缺血及血流动力学改变等)引起实质细胞损伤为起点,最终引起细胞外基质过度沉积和器官组织结构重建。转化生长因子β1(TGFβ1)作为多效生长因子超家族的一员,能够正常调节细胞增殖分化、细胞外基质代谢及免疫应答等。有文献报道认为,TGFP1在分泌性中耳炎中既发挥了免疫抑制作用,又能通过减低细菌诱导的黏蛋白分泌来降低机体天然免疫功能,诱导炎症继续发展。另外,TGFβ1是已知重要的促纤维化因子之一,并有研究证明在许多组织和器官(如肝、肾及肺)纤维化形成中均有明显的表达。基质金属蛋白酶(MMPs)是降解细胞外基质成分的主要酶系。而MMP-9作为该家族的一员,即能直接降解细胞外基质成分又能降解4型胶原纤维。土耳其学者Ozcan等应用基质金属蛋白酶拮抗药物对鼓室硬化发展进行干预后发现硬化程度有所减轻。既往研究表明,在肝纤维化早期,MMP-2和MMP-9活性升高能降解过度沉积细胞外基质,破坏基底膜正常结构,启动了纤维化的发生；在肝纤维化后期,二者的持续升高又进一步促进正常基质成分降解,破坏正常组织结构,导致结构重塑,最终形成恶性循环,共同促进了纤维化进程。另有研究报道,多种炎症细胞因子及生长因子(如TGFβ1, PDGF)均可诱导MMPs的表达,而TGFβ1又能通过抑制基质金属蛋白酶合成和促进金属蛋白酶组织抑制剂表达来减少细胞外基质的降解。大量学者通过对各种炎症和纤维化疾病中转化生长因子β和基质金属蛋白酶的表达研究中提出,对二者的针对性靶治疗可能是治疗和预防疾病发生发展的新方向。鼓室硬化的形成与不断发展不同程度得影响到患者的正常交流,进而降低患者生活、学习及工作质量,甚至对心理造成一定的影响,而至今尚无有效的药物来治疗和预防鼓室硬化症；手术目前是治疗鼓室硬化的主要治疗措施,但术前硬化程度和听骨链破坏程度等都会影响术后的听力恢复。因此,本实验目的是通过建立鼓室硬化动物模型来研究转化生长因子β1及基质金属蛋白酶9在鼓室硬化发展中的表达,并探讨二者在鼓室硬化发生发展过程中可能发挥的作用机制,并为临床实验研究及临床寻找新的治疗与预防措施具有一定的指导意义。目的探讨转化生长因子β1和基质金属蛋白酶-9在鼓室硬化中的表达及其在鼓室硬化形成发展中可能的病理作用机制。方法选取70只健康成年雄性豚鼠(300-350g),并随机分为空白对照组(n=10只)和实验组(n=60只)。应用鼓膜穿刺术向实验组60只豚鼠右耳鼓室内均注入活性3型肺炎链球菌菌悬液(3×108CFU/ml,100ul)并按照6个不同试验点再随机分为6个亚组,包括1周、2周、3周、4周、6周及8周。通过耳镜观察鼓膜钙化形成及应用HE和Von Kossa染色观察鼓室硬化组织形态学改变及钙质形成特点来评估实验性鼓室硬化模型构建情况。利用免疫组织化学法及Western blot法来检测TGFβ1和MMP-9在鼓室硬化中的表达及表达变化规律。结果耳镜观察发现,鼓膜从第二周开始出现轻微的钙化改变,到第六周鼓膜出现明显的钙化形成。HE染色及Von Kossa特殊染色发现在第六周实验动物鼓膜及中耳黏膜组织中均出现明显的鼓室硬化病理学特征表现及钙质沉积。免疫组织化学显示TGFβ1及MMP-9在第六周实验动物鼓膜和中耳黏膜组织中均有明显表达,且均主要表达于成纤维细胞及炎性细胞胞质内。Western blot法检测发现,TGFβ1蛋白表达呈递增趋势,且与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)；MMP-9蛋白表达呈先递后减趋势,且在第四周时表达量最高,而后表达相对减少,但与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TGFβ1与MMP-9在实验性鼓室硬化中均有明显表达,且其蛋白表达在鼓室硬化形成过程中均呈一定趋势性改变,提示二者即参与了鼓室硬化的发生发展又可能在鼓室硬化形成的病理发生机制中起重要作用,同时也对鼓室硬化病理机制研究及鼓室硬化临床治疗与预防的研究有一定的指导性意义。

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中文摘要  6-9
ABSTRACT  9-12
符号说明  12-13
前言和背景  13-15
材料与方法  15-23
结果  23-25
讨论  25-29
结论  29-30
附图  30-33
参考文献  33-37
综述  37-45
  参考文献  43-45
致谢  45-46
攻读硕士学位期间发表的论文目录  46-47
学位论文评阅及答辩情况表  47

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