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DCX和SPAPC共表达对胶质瘤细胞生长、侵袭和放射敏感性的影响及其机制研究

作　者: 徐媛媛
导　师: 刘芬菊
学　校: 苏州大学
专　业: 放射医学
关键词: 脑胶质瘤 DCX SPARC 腺病毒 放射敏感性
分类号: R739.41
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的构建DCX和SPARC双基因共表达腺病毒载体（Ad-DCX-SPARC），研究其对胶质瘤细胞生长、侵袭和放射敏感性的影响及其机制研究。方法1. PCR扩增获得DCX和SPARC目的基因，构建针对DCX和SPARC的pAdTrack-CMV-DCX-polyA+promoter-SPARC双基因共表达重组转移质粒；2.将构建正确的pAdTrack-CMV-DCX-polyA+promoter-SPARC重组转移质粒经PmeI酶切后与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒在BJ5183大肠杆菌中同源重组；3.同源重组质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-DCX-polyA+promoter-SPARC(简称为pAd-DCX-polyA+promoter-SPARC)经PacI酶切后再用脂质体转染QBI-293A细胞，经多轮感染和扩增后获得Ad-DCX-polyA+promoter-SPARC(简称Ad-DCX-SPARC)双基因共表达重组腺病毒载体；4.将Ad-DCX-SPARC重组腺病毒体外感染胶质瘤细胞U251和A172，筛选出Ad-DCX-SPARC的最佳感染剂量；5.通过一系列检测细胞增殖、侵袭和放射敏感性的实验方法，研究增加DCX和SPARC双基因共表达对胶质瘤细胞生长、侵袭和放射敏感性的影响，并分析其可能的作用机制。结果1.成功构建了双启动子介导的DCX和SPARC双基因共表达腺病毒载体Ad-DCX-SPARC，其能高效感染胶质瘤细胞U251和A172，最佳感染剂量分别为20MOI和100MOI；2.腺病毒介导的DCX和SPARC双基因共表达能明显抑制胶质瘤细胞的生长，削弱SPARC促胶质瘤侵袭的作用；3.增加DCX-SPARC双基因共表达能使U251和A172胶质瘤细胞照射后克隆形成能力明显降低；4.单纯增加DCX和SPARC双基因共表达对胶质瘤细胞凋亡无明显影响，但联合辐照后能明显促进胶质瘤细胞的凋亡；5. DCX-SPARC双基因共表达提高了照前G2期细胞的比例，联合X射线照射后能减少照后G2期细胞的阻滞，从而减少了DNA损伤的修复，最终促进了胶质瘤细胞的死亡；6.分子机制检测结果表明Ad-DCX-SPARC联合X射线照射能明显上调U251和A172胶质瘤细胞bax，bad的表达和下调bcl-2的表达。结论1.成功获得了DCX和SPARC双基因共表达腺病毒载体Ad-DCX-SPARC，能明显抑制胶质瘤细胞的生长，削弱SPARC促胶质瘤侵袭的作用；2. DCX和SPARC双基因共表达联合X射线照射能通过抑制胶质瘤细胞的克隆形成、提高照射前G2期细胞阻滞、增加辐照引起的细胞凋亡、使细胞照后G2期的阻滞得到减弱从而减少照后DNA损伤的修复等机制提高脑胶质瘤细胞的放射敏感性；3. Ad-DCX-SPARC联合X射线照射可通过调节U251和A172细胞中bax，bad和bcl-2等细胞凋亡相关基因诱导胶质瘤细胞的凋亡。

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 神经系肿瘤 > 颅内肿瘤及脑肿瘤
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