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维吾尔族妇女宫颈癌发生与TFPI-2基因启动子甲基化的关系研究
作 者: 阿比班·阿克拉
导 师: 阿布力孜·阿布杜拉
学 校: 新疆医科大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 组织因子途径抑制物2(TFPI-2) 宫颈鳞癌 维吾尔族妇女 基因甲基化 启动子区
分类号: R737.33
类 型: 硕士论文
年 份: 2012年
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内容摘要
目的:以往研究报道组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor2,TFPI-2)基因可能是宫颈癌特异性启动子区CpG岛高甲基化基因,但是宫颈癌及癌前病变组织的TFPI-2基因甲基化水平及其对基因表达水平的影响尚待进一步研究。本课题拟明确TFPI-2启动子区CpG片段在宫颈癌细胞内甲基化序列、在宫颈病变组织内各个CpG位点的甲基化水平及其与蛋白质表达水平的关系,探讨宫颈癌发生与特定基因启动子甲基化的内在联系,并评价TFPI-2基因甲基化作为宫颈癌分子标志物的可能性和应用价值。方法:1.利用专业软件寻找TFPI-2基因启动子区序列的CpG岛屿片段,设计与合成亚硫酸修饰测序引物(bisulphate sequencing primer,BSP),提取SiHa宫颈癌细胞基因组DNA,经亚硫酸氢盐修饰,通过CpG岛屿目的片段PCR扩增、克隆和测序,研究宫颈癌细胞内TFPI-2基因启动子CpG片段的整体甲基化水平。2.收集维吾尔族妇女慢性宫颈炎、CIN (cervical intraepithelial neoplasia)和宫颈鳞癌(cervicalsquamous cell carcinoma, CSCC)患者的新鲜组织标本,提取基因组DNA,以TFPI-2基因启动子区CpG岛为目的片段,依托Sequenom MassARRAY甲基化DNA定量分析平台,对宫颈病变组织DNA进行单一CpG位点甲基化定量分析。3.利用维吾尔族妇女宫颈病变患者的石蜡包埋组织标本,采用免疫组织化学方法分析TFPI-2蛋白表达水平。结果:本课题所选TFPI-2基因启动子区CpG片段序列含9个CpG位点,经亚硫酸氢盐测序分析,发现在SiHa宫颈癌细胞基因组中,所有的CpG位点均发生甲基化,无一例外。2.分析Sequenom MassArray (质谱)提供的单一CpG位点甲基化定量数据,发现CSCC与宫颈炎(对照组)之间TFPI-2基因启动子区CpG岛片段(目的片段)的整体片段甲基化水平差异显著(P<0.05),但是CIN与CSCC或正常组之间没有发现任何差异;进一步比较分析CSCC与正常对照组之间的单一CpG位点甲基化水平,发现6个不同CpG位点的甲基化率均有统计学差异(P<0.05)。免疫组织化学分析结果显示,随着宫颈炎向CINI、CINII/III和CSCC的发展进程,TFPI-2蛋白表达水平发生跳跃式或梯度式下降,尤其是蛋白质表达缺失率逐渐增高,CSCC或CIN与宫颈炎组织之间TFPI-2蛋白质表达缺失率存在显著差异(P<0.01)。结论:宫颈癌细胞中TFPI-2基因启动子CpG岛屿片段在整体水平上可能处于高甲基化状态。TFPI-2基因启动子高甲基化及蛋白质表达水平缺失可能是一种宫颈癌特异性分子标志。TFPI-2蛋白质表达缺失可能是基因启动子甲基化的重要表现形式,进一步揭示宫颈癌发生的表观遗传学调控机制。
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全文目录
中英缩略词对照表 5-7 摘要 7-9 Abstract 9-11 前言 11-13 内容与方法 13-24 1. 研究对象 13 2. 实验材料 13-15 2.1 主要仪器 13-14 2.2 材料与试剂 14-15 3. 实验方法 15-23 3.1 TFPI2 基因启动子区的甲基化水平的亚硫酸氢盐修饰测序分析方法 15-21 3.2 Sequenom MassARRAY 甲基化 DNA 定量分析方法 21-22 3.3 石蜡包埋宫颈病变组织切片中 TFPI2 蛋白表达水平的免疫组织化学分析方法 22-23 4. 质量控制 23 5. 统计方法 23-24 结果 24-29 讨论 29-35 小结 35-36 致谢 36-37 参考文献 37-43 综述 43-49 参考文献 46-49 攻读硕士学位期间发表的学位论文 49-50 导师评阅表 50
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
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