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背景与目的宫颈癌是女性较常见的癌症,高危型人乳头瘤病毒(high risk human pap illomavirus,HR-HPV)感染是其主要发病原因。近年来随着对HPV的生物学及流行病学认识的极大提高,其作为引起宫颈上皮内病变主要致病因子已经被人们普遍接受。HPV是高度异变的非折叠的十二面体DNA病毒,常常寄生于宿主鳞状细胞核进行DNA复制。病毒微粒由8000对碱基组成,病毒DNA呈双链环状结构。生殖道HPV依据它们导致浸润性宫颈癌的潜能,被分为高危型HPV和低危型HPV (low risk human pap illomavirus,LR-HPV)。Munoz等的最近一项研究,将HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68,73和82型确定为高危型HPV,将26,53,和66型确定为可能高危型,而HPV6,11,40,42,43,44,54,61,70,72,81和89型确定为低危型。高危型HPV感染主要导致宫颈高级别上皮内病变,而低危型主要与生殖道疣和低级别上皮内病变密切关联。流行病学资料显示：某些特定型别的基因型可导致浸润性宫颈癌或促进持续感染转化为恶性肿瘤[2-4]。甚至,某些有潜在致癌性的HPV型别可以作为预测病变进展的重要指标在早期感染阶段可以检测出来[5-6]。因此,在感染早期鉴定HPV基因型对病人下一步管理及治疗具有重要意义。尽管在世界范围内HPV16,18是宫颈癌最主要的感染型别,但另有证据表明其他型别也高度致癌,而在世界范围内,引起宫颈病变的HPV基因型在不同地区存在差异,因此,明确一个地区HPV主要流行型别对宫颈癌的预防具有重要意义。近20年来关于宫颈癌的防治措施发生了显著的变化,正逐步由二级预防向一级预防即由早发现早治疗向注射HPV疫苗预防HPV感染的方向发展。因此,HPV基因型的鉴定可以为HPV疫苗的研制提供依据。目前正式上市的预防性疫苗即高危型HPV-16、18二价疫苗和HPV16、18、6、11四价疫苗是以欧美地区HPV基因型流行情况为基础研制的,且某一种型别的疫苗对其他型别的HPV感染的预防作用很有限。由于HPV基因型分布具有地区差异性,HPV疫苗的研发及应用需考虑不同区域间HPV型别的分布差异。为了评估HPV感染对宫颈病变的影响和疫苗的使用带来的益处,在不同地区以人群为基础的HPV基因型的测定显得尤为重要。我国是一个幅员辽阔,人口众多的国家,各地区HPV型别也存在差异。河南地区目前尚无明确的HPV感染型别研究数据,本研究拟在河南地区进行各级别宫颈病变HPV感染型别的研究,以期为我国提供以人群为基础的HPV各型别分布情况的相关数据,从而为即将研发的第二代HPV疫苗在人群预防方面提供科学依据,同时为疫苗在河南地区的使用提供客观可靠的数据。高危型HPV感染是宫颈癌及其癌前病变发生发展的必需因素,但不是充分条件,同时存在其它可能增加宫颈癌风险的协同因素。这些协同因素可能通过促进HPV感染,或促进HPV持续感染、或在HPV持续感染后协同HPV促进宫颈上皮内瘤样病变的自然进程等,从而促进宫颈病变的发生发展。因为HPV感染型别具有明显的地区差异性,相关的影响因素及危险因素在不同区域间也不尽相同,尽管已经有较多关于宫颈癌危险因素的研究报道,目前关于河南地区HPV与宫颈癌相关危险因素的研究尚未见报道。本研究通过对河南地区宫颈癌HPV感染的相关危险因素调查,为河南地区的宫颈癌防御提供理论依据,同时为疫苗上市使用后的后续研究,即评价疫苗预防HPV感染的有效率提供可靠数据。材料与方法1研究对象研究对象为2009年8月～2011年4月郑州大学第三附属医院门诊和住院就诊并做宫颈癌筛查患者共524例,经液基细胞学(thinprep cytologic test TCT)检查,细胞学结果阴性(Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy NILM)108例,非典型鳞状上皮细胞(Atypical Squamous Cells of Undetermined Signification ASCUS)105例,低度鳞状上皮内病变(Low-grade squamous Intraepithelial Lesion LSIL)126例,高度鳞状上皮内病变(High-grade squamous Intraepithelial Lesion HSIL)101例,鳞状细胞癌(Squamous Cells Cancer SCC)84例,HPV分型检测标本来源于TCT检测后剩余液基标本,每位受检者要求填写HPV感染危险因素调查表和知情同意书。2方法2.1细胞学检查用Thinprep cell test (TCT)保存液的专用宫颈细胞采集毛刷采集宫颈脱落细胞,将采集后的毛刷在TCT细胞保存液的瓶中反复涮洗,使细胞尽量洗脱下来,然后用ThinPrep2000自动制片机制片,片子制好后用95%酒精固定,经巴氏染色后,树胶封片,片子干燥后,由细胞病理学医师在光学显微镜下阅片,按TBS诊断系统做出诊断结果。2.2检测HPV型别对标本进行DNA提取,PCR扩增后,用Luminex200行流式荧光杂交从而进行HPV型别检测2.3HPV感染危险因素调查统一设计制作HPV危险因素调查表和知情同意书,问卷信息调查采取自愿的原则,只有自愿填写问卷调查表和知情同意书后该患者标本才入选为研究对象。问卷调查人需经过专业培训,所有问卷信息均由问卷调查人统一填写。问卷内容包括：个人信息,人口统计学资料,相关病史,吸烟史,生育史,避孕史,性生活史和卫生习惯,细胞学,病理学和HPV结果。3统计处理用SPSS17.0软件进行统计学分析,各组细胞学结果间多个率的比较用R×C列联表的χ2检验或Fisher确切概率法,检验水准α=0.05；HPV感染危险因素用单因素和多因素Logistic回归分析的统计学方法进行统计学分析,检验水准α=0.05。1HPV型别在各级别病变中的表达率(1).各级别病变组构成比：本研究分型检测成功384例,其中NILM84例占21.9%,细胞学阳性(ASCUS及以上病变)300例占78.1%,其中ASCUS80例占20.8%,LSIL100例占26.0%,HSIL70例占18.2%,SCC50例占13.0%。(2).总体HPV感染情况：总体HPV阳性率78.1%(300/384);单一型别感染率64.8%(249/384),混合感染率13.3%(51/384)；高危型感染率72.7%(279/384),低危型感染率8.9%(34/384);居前五位的型别为HPV16、52、58、33、18；(3).NILM组HPV感染情况：NILM组HPV阳性率57.1%(48/84)；单一感染率42.9%(36/84),混合感染率14.3%(12/84)；主要感染型别依次为：HPV16、6、52、58、31、39。(4).ASCUS组HPV感染情况：HPV阳性率72.5%(58/80),单一感染率52.5%(42/80),混合感染率20.0%(16/80)；居前四位的依次为：HPV16、52、18、58：(5).LSIL组HPV感染情况：HPV阳性率84.0%(84/100),单一感染率77.0%(77/100),混合感染率7.0%(7/100)；居前四位的分别为：HPV52、6、16、58；(6).HSIL组HPV感染情况：HPV阳性率88.6%(62/70),单一感染率74.3%(52/70),混合感染率14.3%(10/70)；感染型别依次为：HPV16、33、58和51;(7).SCC组HPV感染情况：HPV阳性率96.0%(48/50),单一感染率84.0%(42/50),混合感染率12.0%(6/50)；感染型别依次为：HPV16、18、58、33和52。2HPV感染的相关危险因素分析单因素非条件Logistic回归分析各个变量,结果回示：受教育程度,第一次结婚年龄,家庭人均收入,被动吸烟,曾经怀孕,人工流产,使用避孕套,第一次性生活的年龄,性伴侣数,性伴侣有多个性伴与HPV感染相关(均P<0.05),其中受教育程度高、家庭人均收入多、使用避孕套、第一次性生活年龄大是HPV感染的保护因索(OR<1),其余均是HPV感染的危险因索(OR>1)；单因素分析后,将结果中有意义(P<0.05)的变量再进行多因素非条件Logistic回归分析,结果显示：家庭人均收入低,第一次性生活年龄小,被动吸烟和人工流产是HPV感染的危险因素(P<0.05)。结论1.HPV感染率随宫颈细胞学病变级别的增高而上升；2.河南地区不同宫颈病变人群HPV感染主要以高危型、单一型别感染主；3.HPV16是河南地区最常见的感染型别,其次是HPV52/58,HPV18排序相对靠后,居第四位。4.HPV16在HSIL, SCC中感染最常见,然后是HPV33,其次HPV18、58；5.受教育程度低、经济收较少、被动吸烟、人工流产、第一次性生活年龄小、性伴侣数多是HPV感染的危险因素(OR>1)。
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