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实验性糖尿病周围神经病变大鼠Pou3f3/Brn-1的表达变化及基因表达谱分析
作 者: 殷娟
导 师: 杨红英; 王廷华
学 校:
专 业: 临床检验诊断学
关键词: 糖尿病 SD大鼠 链脲佐菌素 神经病变 神经电生理 pou3f3/Brn-1 坐骨神经 糖尿病周围神经病变 基因表达谱芯片
分类号: R587.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2012年
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内容摘要
第一部分:实验性糖尿病大鼠模型的建立及神经病变指标检测’目的建立实验性糖尿病大鼠模型,进行坐骨神经的功能学和形态学检测以诊断有无神经病变的发生,为观测糖尿病神经病变相关指标奠定基础。方法雄性SD大鼠60只,分为普通饲料对照组(NC)、高脂饲料对照组(HC)和糖尿病组(DM)。高脂饲料喂养加链脲佐菌素注射诱导2型糖尿病,72h后检测血糖浓度,观察成模率和死亡率。糖尿病8周后神经电生理检测坐骨神经干动作电位传导速度,电镜检测坐骨神经形态学变化。结果糖尿病组大鼠注射STZ后直至实验结束其血糖水平显著高于普通饲料对照组和高脂饲料对照组大鼠(P<0.05),体重在注射STZ前增长较快,而注射STZ后体重增速减慢,接近普通饲料对照组。糖尿病8周后,部分大鼠出现神经病变,坐骨神经干动作电位传导速度显著较低(P<0.05),并出现明显的脱髓鞘等病理变化。结论高脂饮食结合小剂量STZ注射能够复制出糖尿病发生过程近似于人类的实验性2型糖尿病大鼠模型,且成活率高。该模型有利于造成血管神经病变,是研究2型糖尿病及其并发症发生机制的理想的动物模型。经由神经电生理检出的坐骨神经干动作电位传导速度显著降低的糖尿病大鼠,其坐骨神经在电镜下呈严重地脱髓鞘变化,说明神经电生理是检测糖尿病神经病变的敏感且特异的良好方法。第二部分:pou3f3/Brn-1在糖尿病周围神经病变时表达变化目的观察糖尿病大鼠周围神经病变时pou3f3/Brn-1在mRNA和蛋白水平的表达变化,以推测其在糖尿病周围神经病变时可能产生的生理病理学作用。方法采用第一部分建立的糖尿病大鼠模型,按并发周围神经病变(DPN)和未并发周围神经病变(DM)分组,并以普通饲料喂养组(正常对照组,NC)和高脂饲料喂养组(高脂对照组,HC)为对照,PCR检测pou3f3mRNA的表达水平,WB检测pou3f3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,糖尿病周围神经病变组大鼠坐骨神经中的pou3f3mRNA水平明显下调(P<0.05),用western blot的方式未检测出pou3f3蛋白的表达。结论1.血糖——代谢失调可能使pou3f3mRNA表达增加,神经病变可能使pou3f3mRNA表达下调。2.pou3f3蛋白在成年大鼠的坐骨神经中可能不表达。第三部分:实验性糖尿病神经病变时的基因表达谱分析目的运用基因芯片技术获取实验性DPN大鼠与正常对照组、DM组坐骨神经中组织差异的表达基因,对数据进行分析,从多基因角度探讨DPN发病的分子机制,为DPN的诊断、治疗和预后提供帮助。方法采用第一部分建立的大鼠模型,提取DPN、DM和NC组大鼠的坐骨神经组织总RNA,反转录成cDNA同时进行标记与基因表达谱芯片杂交,使用Agilent Rat4x44K Gene Expression Microarrays检测各组大鼠坐骨神经组织中的基因表达,采集图像后进行数据分析。结果与NC相比,DPN组的坐骨神经中共有567个基因上调,886个基因下调。与DM组相比,DPN组大鼠的坐骨神经中共有532个基因上调,693个基因下调。结论DPN坐骨神经组织与正常、DM坐骨神经组织的表达谱存在较大差异,利用基因表达谱芯片可筛选出DPN差异表达的基因,从而为临床进行DPN的诊断和治疗提供有价值的实验室依据。
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全文目录
缩略词表 6-7 第一部分:实验性糖尿病大鼠模型的建立及神经病变指标检测 7-23 中文摘要 7-8 英文摘要 8-10 前言 10 材料与方法 10-13 结果 13-16 讨论 16-18 结论 18-20 参考文献 20-23 第二部分:pou3f3/Brn-1在糖尿病周围神经病变时表达变化 23-43 中文摘要 23-24 英文摘要 24-25 前言 25-26 材料与方法 26-36 结果 36-38 讨论 38-40 结论 40-41 参考文献 41-43 第三部分:实验性糖尿病神经病变时的基因表达谱分析 43-67 中文摘要 43-44 英文摘要 44-45 前言 45 材料与方法 45-48 结果 48-64 讨论 64-65 结论 65-66 参考文献 66-67 综述 67-74 参考文献 71-74 已刊文章目录 74-75 致谢 75
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病性昏迷及其他并发症
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