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强骨宝方对去卵巢骨质疏松大鼠的骨组织蛋白质组影响的研究

作　者: 李远志
导　师: 苏友新
学　校: 福建中医学院
专　业: 中医骨伤科学
关键词: 骨质疏松骨和骨组织蛋白质组质谱分析 @强骨宝方
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:通过观察中药强骨宝方干预去卵巢骨质疏松大鼠骨组织功能蛋白质组的变化,探讨本方防治绝经后骨质疏松症的机制。方法:1.中药强骨宝方混悬浓缩液制备,WISTAR大鼠分组并切除双侧卵巢进行绝经后骨质疏松造模,常规饲养及中药干预下饲养。2.假手术大鼠、去卵巢造模大鼠及中药干预下的造模大鼠在造模后20周取股骨的密质骨、腰椎的松质骨标本进行总蛋白质提取及研究样品制备。3.用2-D双向电泳技术展示各组2种不同组织样品蛋白质组图谱。4.对各组间相应骨组织的功能蛋白质组图谱差异进行比较并靶定差异表达的蛋白点。5.应用生物质谱技术及生物信息分析方法定性各组间相应骨组织差异表达的功能蛋白质。6.分析并确认与绝经后骨质疏松症发病及中药强骨宝干预相关的骨组织功能蛋白质。结果:1.大鼠绝经后骨质疏松症的模型造模成功:假手术组与模型组的腰椎及股骨平均骨密度均有非常显著性差异(P值均＜0.01),模型组与中药干预组腰椎及股骨平均骨密度也均有显著性差异(P值分别为P＜0.05),假手术组与中药干预组无显著性差异(P＞0.05)。按照骨密度均数低于假手术组25%的标准,则模型组两个部位的平均骨密度已达到骨质疏松症的标准.表明造模是成功的。而中药干预组两个部位的骨密度虽均未达到假手术组水平,但明显高于模型组,说明强骨宝对切除卵巢所引起的骨密度下降有预防作用。2.2-D双向电泳获得的各凝胶图谱中可辨别的蛋白点数目分别为:股骨各组均为400个,腰椎各组均为600个。3.比较股骨与腰椎标本在模型组、假手术组及中药干预组间差异表达的蛋白点,共得差异蛋白点50个,股骨标本25个,腰椎标本25个。其中股骨标本以假手术组为参考,模型组有6个下调表达蛋白、4个上调表达蛋白,中药干预组有3个下调表达蛋白、3个上调表达蛋白;以模型组为参考,中药干预组有5个上调表达蛋白、4个下调表达蛋白。腰椎标本以假手术组为参考,模型组有10个上调表达蛋白,中药干预组有5个下调表达蛋白、3个上调表达蛋白;以模型组为参考,中药干预组有7个下调表达蛋白。4.将差异表达的50个蛋白质点,使用MASCOT搜库软件对本地数据库进行检索,以Protein Score大于61分且C.I%＞95%当作可信蛋白质种类,最终获得30个可信的蛋白点。5.经生物质谱技术鉴定,30个可信的蛋白点中5个为未知蛋白。最后确认:股骨与骨质疏松发病可能相关的蛋白6个,分别为:乳铁蛋白轻链、膜联蛋白A3、烯醇化酶、ATP合酶、乙酰辅酶A还原酶、肌钙蛋白;腰椎与骨质疏松发病可能相关的蛋白5个,分别为:肌动蛋白、角蛋白、烯醇化酶、ATP合酶、肌球蛋白;股骨与强骨宝疗效可能相关的蛋白9个,分别为:烯醇化酶、ATP合酶、肌钙蛋白、肌酸激酶同工酶、磷酸甘油酸变味酶、肌球蛋白、乳铁蛋白轻链、丙酮酸激酶同工酶、冠蛋白;腰椎与强骨宝疗效可能相关的蛋白8个,分别为:碳酸酐酶、肌动蛋白、αB-晶体蛋白、3-磷酸甘油醛脱氢酶、血清白蛋白、ATP合酶、肌球蛋白、烯醇化酶。结论:1.从股骨密质骨蛋白质组表达分析可知,乳铁蛋白轻链、膜联蛋白A3的表达下降及烯醇化酶、ATP合酶、乙酰辅酶A还原酶、肌钙蛋白的表达增强,可能与去卵巢后股骨密质骨骨质疏松的发生相关;强骨宝对股骨骨质疏松的干预效应可能与下调烯醇化酶、ATP合酶、肌钙蛋白、肌酸激酶同工酶、磷酸甘油酸变味酶、肌球蛋白的表达,和上调乳铁蛋白轻链、丙酮酸激酶同工酶、冠蛋白的表达有关。2.从腰椎松质骨蛋白质组表达分析可知,肌动蛋白、角蛋白、烯醇化酶、ATP合酶、肌球蛋白的表达增强可能与去卵巢后腰椎松质骨骨质疏松的发生相关;强骨宝对腰椎骨质疏松的干预效应可能与下调碳酸酐酶、肌动蛋白、αB-晶体蛋白、3-磷酸甘油醛脱氢酶、血清白蛋白、ATP合酶、肌球蛋白、烯醇化酶的表达有关。

强骨宝方对去卵巢骨质疏松大鼠的骨组织蛋白质组影响的研究

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