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鼻咽癌细胞系质膜蛋白质组学研究

作 者: 刘晓慧
导 师: 谢锦云;梁宋平
学 校: 湖南师范大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 鼻咽癌 质膜 蛋白质组学 分化
分类号: R739.63
类 型: 硕士论文
年 份: 2006年
下 载: 9次
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内容摘要


采用鼻咽癌细胞系HNE1质膜为研究对象,分成三部分研究细胞表面蛋白质:(1)通过0.1M Na2CO3、水和生物素处理细胞表面富集到细胞外周蛋白质,(2)通过Percoll密度梯度超速离心得到全质膜,(3)对细胞匀浆Na2CO3处理后再进行Pereoll密度梯度超速离心得到整合质膜的蛋白质。对这三部分的细胞表面蛋白质通过一维SDS-PAGE及双向凝胶电泳分离结合电喷雾四极杆串联质谱(ESI-Q-TOF)和基质辅助激光解析串联质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定,以及“shotgun”等技术路线对蛋白质进行分离鉴定,一共鉴定了856个非冗余蛋白质。通过生物信息学分析,发现在鉴定的结果中共有58个与癌症相关的蛋白质,在细胞信号分子分析中发现112个蛋白质在细胞信号转导通路中起到重要作用,另有21个蛋白质在疾病相关通路中扮演重要角色。我们同时将所有鉴定到的蛋白质输入Binding数据库搜索,利用Pajek软件分析,构建了一个蛋白质相互作用的关系图。我们对鉴定到的蛋白质中的Galectin-1,nm23,Keratin 8,HSP-70,VCP进行了免疫细胞学分析,发现这些在前人研究中定位在胞浆和核上的蛋白质,同样也定位在细胞膜上。同时,我们对不同分化程度的鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2的细胞质膜进行了差异蛋白质组的分析。通过Percoll密度梯度离心,用Western Blot Dot分析,取富集了细胞质膜的一层,用丙酮沉淀后再裂解得到蛋白质。采取2DE的方法对蛋白质进行分离鉴定。对2DE的图谱进行了PDQUEST 7.2分析,应用MALDI-TOF-TOF鉴定,其中13个差异蛋白质得到了准确鉴定;对差异蛋白质中具有重要意义的蛋白质,如Gelectin-1和Annexin Ⅱ进行Western blot得到了证实。对Cytokeratin 8和HSP 70等蛋白质通过实时RT-PCR分析。

全文目录


中文摘要  3-5
英文摘要  5-7
缩写表(中英文对照)  7-11
1.肿瘤蛋白质组学研究进展  11-39
  1 肿瘤蛋白质组学的简介  11-14
  2 结构/表达蛋白质组学研究手段及策略  14-17
  3 主要的蛋白质分离技术  17-26
  4 蛋白质分析、鉴定技术  26-31
  5 蛋白质组学研究其他新方法和技术  31-34
  6 生物信息学  34-35
  7 本文的研究背景和思路  35-39
2.鼻咽癌细胞系HNE1细胞表面蛋白质组全息研究  39-65
  1 材料与仪器  39-40
  2 实验方法  40-48
  3 结果及讨论  48-65
3.不同分化程度的鼻咽癌细胞系质膜蛋白质组差异分析研究  65-79
  1 材料与仪器  65-66
  2 实验方法及过程  66-70
  3 结果与讨论  70-76
  4 小结  76-79
4.进一步研究设想  79-81
参考文献  81-96
附录  96-100
致谢  100-102

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 耳鼻咽喉肿瘤 > 咽肿瘤
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