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苦参素对HSC-T6增殖和活化的影响及机制的初步探讨

作　者: 刘小云
导　师: 刘世坤
学　校: 中南大学
专　业: 药学
关键词: 苦参素 肝星状细胞 胶原 端粒酶 组织金属蛋白酶抑制剂
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的以大鼠肝星状细胞株HSC-T6为实验对象,通过以下三方面的实验,研究苦参素对HSC-T6细胞株的影响并初步探讨其发生机制。一、观察苦参素对HSC-T6增殖的影响；二、检测苦参素对HSC-T6活化的影响；三、检测苦参素对端粒酶表达的影响。方法以浓度为2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL的苦参素分别作用于肝星状细胞不同时间(24h、48h和72h),采用MTT比色法检测苦参素对肝星状细胞增殖的影响。用逆转录聚合酶链式反应检测与肝星状细胞活化有关的指标：α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原和TIMP-1mRNA的表达,同时检测rTERTmRNA的表达变化。结果苦参素可以抑制肝星状细胞的增殖,随着作用浓度升高和时间的延长,苦参素对肝星状细胞增殖的抑制作用逐渐增强。苦参素作用24h,加药组组和对照组的α-SMA、Col Ⅰ、Col Ⅲ及TIMP-1mRNA表达的差异无统计学意义(P>0.05),而rTERTmRNA在苦参素组的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。苦参素作用48h,浓度为6mg/mL苦参素组的α-SMA和TIMP-1mRNA表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但是Col Ⅰ、Col Ⅲ和rTERTmRNA表达和对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)；苦参素作用72h,各苦参素组Col Ⅰ、Col Ⅲ和rTERTmRNA的表达与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),而4mg/mL和6mg/mL苦参素组的α-SMA和TIMP-1mRNA表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1、苦参素可以抑制肝星状细胞的增殖,抑制作用随着时间和浓度的增加而增强；2、苦参素能够抑制肝星状细胞的活化,可抑制基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)的表达；3、苦参素对活化的肝星状细胞内的Ⅰ型胶原、Ⅲ型前胶原的合成没有影响；4、苦参素对肝星状细胞的影响可能和端粒酶有关。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-9
英文缩略词表  9-11
第一章 前言  11-15
第二章 材料和方法  15-27
  2.1 实验材料  15-18
    2.1.1 细胞来源  15
    2.1.2 试剂与耗材  15-16
    2.1.3 仪器与设备  16
    2.1.4 耗材的清洗  16-17
    2.1.5 溶液的配制  17-18
  2.2 实验方法  18-25
    2.2.1 细胞培养  18-19
    2.2.2 MTT法检测细胞增殖  19-20
    2.2.3 RNA的提取和逆转录反应  20-21
    2.2.4 聚合酶链式反应(PCR)  21-25
  2.3 统计分析  25-27
第三章 实验结果  27-41
  3.1 MTT结果  27-32
    3.1.1 苦参素对肝星状细胞形态及数量的影响  27-31
    3.1.2 苦参素对肝星状细胞生存率的影响  31-32
  3.2 聚合酶链式反应(PCR)  32-41
    3.2.1 苦参素对HSC-T6表达α-SMAmRNA的影响  32-34
    3.2.2 苦参素对HSC-T6表达Col Ⅰ mRNA的影响  34-35
    3.2.3 苦参素对HSC-T6表达Col ⅢmRNA的影响  35-36
    3.2.4 苦参素对HSC-T6表达TIMP-1mRNA的影响  36-38
    3.2.5 苦参素对HSC-T6表达rTERTmRNA的影响  38-41
第四章 讨论  41-47
  4.1 苦参素抑制肝星状细胞增殖  41
  4.2 苦参素抑制HSC-T6的α-SMAmRNA表达  41-42
  4.3 苦参素对HSC-T6的Col Ⅰ、Col ⅢmRNA表达无影响  42-43
  4.4 苦参素抑制HSC-T6的TIMP-1mRNA的表达  43-44
  4.5 苦参素对HSC-T6表达rTERTmRNA的影响  44-47
第五章 结论  47-49
参考文献  49-53
综述  53-67
  REFERENCES  64-67
致谢  67-69
攻读硕士学位期间研究成果  69

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