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维甲酸联合苦参素干预大鼠肝癌变进程中β-catenin、E-cadherin、MMP-7的动态变化

作　者: 李林
导　师: 张红绪
学　校: 河南师范大学
专　业: 生理学
关键词: 肝癌 β-连环素 上皮型钙粘素 基质金属蛋白酶-7 全反式维甲酸 苦参素 干预
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:探讨SD大鼠肝癌变及维甲酸联合苦参素干预下β-catenin、E-cadherin、MMP-7三种蛋白因子的动态变化规律及其作用机制,为准确筛选肝癌早期预警分子,寻求副作用小、有效的抗肝癌中药材提供参考数据。方法:采用二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine, DENA)作诱癌剂,维甲酸(ATRA)联合苦参素(OMT)作为干预药物建立SD大鼠肝癌变不同时期的动物模型。自给药起,分别在14d、28d、42d、56d、70d、84d、98d、112d、126d处死大鼠,利用免疫组化、Western blot技术检测大鼠肝组织中上述三种因子的表达变化。结果:①病理结果:诱癌组大鼠14-28d呈轻度炎性反应(MIR),42d出现重度炎性反应(SIR),持续到70d为腺瘤样增生(AH),98-112d呈非典型腺瘤样增生(AAH),126d出现胆管细胞癌(CCC)。②免疫组化:自SIR时期起至CCC,诱癌组β-catenin表达呈现细胞间质/胞膜-胞浆/胞核的异位转移,胞膜表达量减少,胞浆/核表达增多,与对照组及干预组均呈极显著差异(P<0.01)。诱癌组E-cadherin阳性率随着诱癌时间延长而逐渐下降,从AH阶段至CCC呈极显著差异(P<0.01);干预组的下降趋势比诱癌组迟缓,在AH、CCC期呈极显著差异(P<0.01)。诱癌组MMP-7表达呈现胞膜内缘-胞浆-细胞间质的异位转移,在诱癌后期(AAH、CCC)明显下降,与对照组及干预组呈极显著差异(P<0.01)。③Western blot:诱癌组与干预组β-catenin含量均呈持续增高趋势。诱癌组在SIR、AH阶段,与对照组呈显著差异(P<0.05),AAH、CCC阶段呈极显著差异(P<0.01);干预组的升高趋势略缓,自AAH始至CCC,显著低于诱癌组(P<0.05)。诱癌组与干预组E-cadherin均呈持续下降趋势,诱癌组自AH阶段与对照组呈显著差异(P<0.05),AAH、CCC呈极显著差异(P<0.01),但与干预组始终差异不显著。MMP-7总蛋白呈现先上升后下降再上升的趋势,整个过程中,诱癌组除MIR与对照组呈显著差异外,其它均极显著高于对照组(P<0.01);干预组MMP-7大多低于诱癌组,MIR、SIR期呈显著差异(P<0.05),AH及CCC呈极显著差异(P<0.01)。结论:从病理切片以及β-catenin、E-cadherin、MMP-7三种蛋白因子在免疫组化及Western blot水平上的表达来看,维甲酸联合苦参素治疗大鼠肝癌变具有一定的干预效应,能够在一定程度上对肝癌的发生发展起到一定的抑制作用。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
缩略语  8-12
第一章 前言  12-28
  1.1 肝癌概述  12-14
  1.2 肝癌的诊断  14-15
    1.2.1 甲胎蛋白(AFP)  14
    1.2.2 HepParl  14-15
    1.2.3 Glypican(GPC3)  15
    1.2.4 CK8、CK18、CK7、CK17 和CK19  15
  1.3 肝癌病因学  15-17
    1.3.1 肝炎病毒  15-16
    1.3.2 黄曲霉毒素B1(AFB1)  16
    1.3.3 氯乙烯(Vinyl chloride)  16
    1.3.4 亚硝基类化合物  16-17
  1.4 肝癌的治疗  17-20
    1.4.1 传统治疗  17
    1.4.2 中药治疗  17-20
    1.4.3 微创治疗  20
    1.4.4 分子靶向药物治疗  20
  1.5 E-cadherin 与肝癌  20-22
  1.6 β-catenin 与肝癌  22-23
  1.7 MMP-7 与肝癌  23-28
第二章 材料与方法  28-38
  2.1 材料  28-32
    2.1.1 SD 大鼠肝癌变及干预模型的建立  28-29
    2.1.2 主要试剂  29-30
    2.1.3 一般试剂配制  30-31
    2.1.4 主要仪器设备  31-32
  2.2 大鼠肝组织病理学切片制作与观察  32-33
    2.2.1 载玻片、盖玻片预处理  32
    2.2.2 组织病理切片的制作  32-33
    2.2.3 镜检观察  33
  2.3 免疫组化  33-35
    2.3.1 切片要求  33-34
    2.3.2 脱蜡至水  34
    2.3.3 抗原修复  34
    2.3.4 封闭内源性过氧化物酶  34
    2.3.5 一抗、二抗孵育  34
    2.3.6 DAB 显色  34
    2.3.7 苏木精染色、分色蓝化  34-35
    2.3.8 脱水透明并封片  35
    2.3.9 阳性细胞结果分析  35
  2.4 Western Blot  35-38
    2.4.1 肝组织样品处理  35
    2.4.2 样品蛋白浓度测定(Bradford 法)  35-36
    2.4.3 SDS-PAGE 电泳  36
    2.4.4 免疫印迹  36-37
    2.4.5 结果分析  37-38
第三章 结果  38-50
  3.1 大鼠肝癌病理结果  38-40
    3.1.1 大鼠体征变化结果  38
    3.1.2 大鼠肝脏组织表观观察结果  38-39
    3.1.3 病理切片的显微观察结果  39-40
  3.2 β-catenin 结果  40-43
    3.2.1 β-catenin 免疫印迹结果  40-41
    3.2.2 β-catenin 免疫组化结果  41-43
  3.3 E-cadherin 结果  43-45
    3.3.1 E-cadherin 免疫印迹结果  43-44
    3.3.2 E-cadherin 免疫组化结果  44-45
  3.4 MMP-7 结果  45-50
    3.4.1 MMP-7 免疫印迹结果  45-48
    3.4.2 MMP-7 免疫组化结果  48-50
第四章 分析讨论  50-62
  4.1 组织形态学比较  50
  4.2 β-catenin 在大鼠肝癌变及干预进程中的变化  50-55
  4.3 E-cadherin 在大鼠肝癌变及干预进程中的变化  55-57
  4.4 MMP-7 在大鼠肝癌变及干预进程中的变化  57-59
  4.5 肝癌变及干预进程中多种因子协同作用  59-62
第五章 结论  62-64
参考文献  64-72
图版  72-90
致谢  90-92
攻读学位期间发表的学术论文目录  92-93

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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