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养殖许氏平鲉两种细菌性病原的分离、鉴定及组织病理学研究

作　者: 王庚申
导　师: 王印庚
学　校: 上海海洋大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 许氏平鲉鳗利斯顿氏菌鱼肠道弧菌病原学组织病理学
分类号: S943
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

许氏平鲉是我国北方地区海水网箱养殖的重要经济鱼类之一，因其生长快、耐低温、肉质鲜美，深受养殖者和消费者的喜爱。然而，随着养殖规模的扩大、集约化程度的提高，加之疾病防控技术水平不高，造成许氏平鲉病害尤其是细菌性疾病时有发生，给广大养殖业者造成了较大的经济损失。2011年8月，青岛某养殖场网箱养殖许氏平鲉爆发皮肤溃疡病，累积死亡率达到30%，病鱼主要症状为体表全身性充血、溃烂，解剖可见腹腔有血色积水，肝脏不同程度肿胀、充血，脾、肾肿大，呈糜烂状；2011年7月，烟台某养殖场网箱养殖许氏平鲉爆发鱼肠道弧菌病，死亡率达到30%~40%，主要表现为嘴部、鳃盖及鳍条充血，胸鳍及尾鳍腐烂，解剖发现腹腔有积液，肝脏大面积充血，肠道有黄绿色脓液流出。从两例病鱼样品中分别分离得到1株优势菌，其中分离自青岛病例的菌株标号为SS-1，分离自烟台病例的菌株标号为SS-3。本研究对两株致病菌的形态学特征、生理生化特性、16S rRNA基因序列同源性、致病性和药物敏感性进行了研究，并对病鱼的组织病理变化进行了观察分析。菌株SS-1为革兰氏阴性菌，弧形短杆状，两端钝圆，极生单鞭毛；生理生化结果表明该菌与鳗利斯顿氏菌生理生化指标相符；对该菌16S rRNA基因序列分析，结果显示该菌与鳗利斯顿氏菌同源性最高，因此，将其鉴定为鳗利斯顿氏菌（Listonella anguillarum）。经人工感染实验证实该菌对健康的许氏平鲉具有较强的致病性，且感染症状与自然发病症状相似。该菌对复达欣、氟罗沙星、萘啶酸、新生霉素等抗生素药物高度敏感。对感染皮肤溃疡病的许氏平鲉进行组织病理观察，结果显示病鱼鳃丝的鳃小片充血，上皮细胞和粘液细胞增生、坏死、脱落，造成鳃小片变短、变粗、相互粘连；肌纤维断裂、坏死，结构溶解，肌纤维之间有血细胞浸润；肝脏组织发生明显的脂肪变性，肝细胞坏死、溶解、结构模糊；脾脏组织坏死，结构不整，出现褐色斑块；肾小管结构模糊，相互融合，管腔消失，红细胞数量减少；肠粘膜上皮细胞脱落，固有层坏死，肠壁肌肉层充血、发炎，明显的组织增生。菌株SS-3为革兰氏阴性菌，短杆状，两端钝圆，端生一根鞭毛；通过测定该菌的16S rRNA基因序列，并结合细菌形态学和生理生化实验结果，将该菌鉴定为鱼肠道弧菌（Vibrio ichthyoenteri）。经人工感染实验证实该菌对健康的许氏平鲉具有较强的致病性，感染症状与自然发病症状相似。药敏实验结果表明该菌对青霉素、菌必治、氟罗沙星、克拉霉素、丁胺卡那、美满霉素等多种药物高度敏感。感染该菌的许氏平鲉病鱼鳃丝充血，鳃小片上皮细胞增生、坏死、脱落，炎性细胞浸润，鳃小片相互粘连；肌肉组织淤血，血细胞富集，肌纤维细胞变性、坏死，炎性细胞浸润，形成结节；肝细胞空泡变性，细胞结构模糊，肝血窦、毛细血管淤血；脾脏充血，细胞坏死，结构模糊，HE染色呈褐色；肾小管萎缩，上皮细胞脱落，管腔消失，肾间质充斥大量红细胞；肠绒毛严重萎缩，上皮细胞坏死、脱落，肌肉层出血，炎性细胞浸润。根据细菌分离和组织病理学观察结果，两种致病菌感染许氏平鲉后都能造成鱼体多种组织和器官的损伤，并引起大量死亡，对养殖生产危害较大。本论文率先对许氏平鲉皮肤溃疡病和鱼肠道弧菌病的流行症状、病原及组织病理变化进行了报道。确定了两种疾病的致病原、测定了其药物敏感谱、分析了两种疾病的组织病理特征，为许氏平鲉的健康养殖和疾病防控提供科学依据和参考。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
目录  9-12
引言  12-23
  1.1 许氏平鲉的生物学特性  12-15
    1.1.1 形态特征  12-13
    1.1.2 产地分布  13
    1.1.3 生活习性  13
    1.1.4 食性与生长  13-14
    1.1.5 繁殖  14
    1.1.6 养殖概况  14-15
  1.2 许氏平鲉常见疾病的研究进展  15-23
    1.2.1 国内外研究现状  15-16
    1.2.2 许氏平鲉常见疾病  16-23
第二章许氏平鲉皮肤溃疡病的病原学研究  23-38
  2.1 材料与方法  24-26
    2.1.1 材料  24
    2.1.2 病原菌的分离与纯化  24
    2.1.3 人工感染实验  24-25
    2.1.4 病原菌的鉴定  25
    2.1.5 细菌 16S rRNA 基因序列同源性分析  25-26
    2.1.6 药物敏感实验  26
  2.2 结果  26-35
    2.2.1 病原菌的分离  26-27
    2.2.2 人工感染实验  27-29
    2.2.3 病原菌的鉴定  29-31
    2.2.4 菌株 SS-1 16S rRNA 基因序列同源性分析  31-33
    2.2.5 药物敏感实验结果  33-35
  2.3 讨论  35-38
    2.3.1 致病菌的确定及其致病性  35-36
    2.3.2 病原菌的药物敏感性  36
    2.3.3 疾病的防控策略  36-38
第三章许氏平鲉皮肤溃疡病的组织病理学分析  38-43
  3.1 材料与方法  38-39
    3.1.1 材料  38
    3.1.2 组织切片的制备与观察  38-39
  3.2 结果  39-43
    3.2.1 许氏平鲉皮肤溃疡病的组织病理学分析  39-43
第四章许氏平鲉鱼肠道弧菌病的病原学研究  43-55
  4.1 材料与方法  43-45
    4.1.1 材料来源  43-44
    4.1.2 病原菌的分离与纯化  44
    3.1.3 人工感染预实验  44
    4.1.4 人工感染实验  44
    4.1.5 病原菌的鉴定  44
    4.1.6 细菌 16Sr RNA 基因序列同源性分析  44
    4.1.7 药物敏感实验  44-45
  4.2 结果  45-53
    4.2.1 病原菌的分离  45
    4.2.2 人工感染预实验  45
    4.2.3 人工感染实验  45-46
    4.2.4 病原菌的鉴定  46-49
    4.2.5 菌株 SS-316S rRNA 基因序列同源性分析  49-52
    4.2.6 药敏实验结果  52-53
  4.3 讨论  53-55
    4.3.1 致病菌的确定及其致病性  53-54
    4.3.2 病原菌的药物敏感性  54-55
第五章许氏平鲉鱼肠道弧菌病的组织病理学分析  55-59
  5.1 材料与方法  55
    5.1.1 材料  55
    5.1.2 组织切片的制备与观察  55
  5.2 结果  55-59
    5.2.1 许氏平鲉鱼肠道弧菌病的组织病理学分析  55-59
第六章结论与展望  59-61
  6.1 结论  59-60
  6.2 试验中存在的不足及尚需解决的问题  60-61
参考文献  61-67
攻读硕士学位期间发表的学术论文  67-68
致谢  68

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