学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

抗副猪嗜血杆菌猪源化嵌合抗体的构建、表达及其活性鉴定

作　者: 姜福成
导　师: 李曦
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 副猪嗜血杆菌抗体治疗猪源化抗体杆状病毒表达
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 36次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS），属巴斯德杆菌科，非溶血性的、具有NAD依赖性的革兰氏阴性菌。副猪嗜血杆菌属于条件性致病菌，它可以在应激的情况下入侵机体而引起严重的全身性疾病，即格拉瑟氏（Glasser’s）病。临床主要表现为：猪的多发性浆膜炎、脑膜炎和关节炎，全身性的纤维素性浆膜炎等；也有研究表明，HPS可以引起幼猪肺炎，可以导致幼猪突然死亡，具有高发病率和高死亡率的特征。目前对HPS的检测主要是通过PCR检测。目前防治猪的副嗜血杆菌病主要是通过疫苗免疫和抗生素治疗2个途径。其中，疫苗免疫方面，目前主要应用的是4型、5型联合的灭活苗免疫，依据国际认可的血清学分型方法，可以将副猪嗜血杆菌分成15个血清型，但仍有超过20%左右的菌株无法分型，疫苗免疫主要针对的是流行猪群中主要致病亚型采取的对应的预防免疫。抗体治疗是一种特异性的治疗方式，针对特定的病原的靶向性治疗。在动物疫病的治疗上，目前主要应用于犬病、猪病的治疗。由于鼠源性单抗在另外的动物体内的半衰期短，且可能会引起抗抗体反应，因此鼠源性单抗在抗体治疗中的引用不大，而人源化抗体在抗体的研究与应用中始终处于领先地位，到目前为止，已经有许多的人源化抗体上市应用并取得非常好的治疗效果。本研究基于人源化抗体的研究基础，为了克服鼠源性抗体在猪体内半衰期短和猪体内可能存在的抗抗体反应，我们对于单克隆抗体进行了猪源化改造。对于我们实验室已经制备好且证明对于十五个血清型都有很好的交叉保护作用的单克隆抗1D8进行了猪源化改造，我们通过RT-PCR技术，成功的克隆出了猪的轻重链恒定区HC、LC与单克隆抗体1D8的轻重链可变区LV、HV部分，然后通过融合PCR技术成功的克隆出了重组抗体蛋白的轻重链序列，通过双酶切与连接转化技术，成功的将我们的轻重链序列连接到双向表达载体pFast-Bac-Dual上，成功构建表达载体pFast-Bac-Dual-H+L，然后通过杆状病毒表达技术，成功表达了嵌合抗体。我们将表达的抗体蛋白与HPS混合孵育后均匀涂布与TSA培养基，发现表达的抗体蛋白具有很好的体外抑菌作用，抑菌效果可达80-90%，在体内抑菌试验过程中，阴性对照小鼠全部死亡，阳性对照与我们的重组蛋白小鼠的存活率皆为50%，从而表明我们的重组蛋白具有很好的生物学活性，为以后的副猪嗜血杆菌病的抗体治疗提供了理论基础。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-8
第一章文献综述  8-17
  1.1 副猪嗜血杆菌  8-13
  1.2 人源化抗体  13-15
  1.3 杆状病毒表达系统  15-17
第二章猪源化抗体的构建、表达及其活性鉴定  17-36
  2.1 试验材料  17-18
  2.2 试验方法  18-29
  2.3 试验结果  29-34
  2.4 讨论  34-36
第三章结论  36-37
参考文献  37-43
致谢  43-44
附录  44-48
  附录 1 主要溶液及配制  44-46
  附录 2 重组抗体轻重链序列  46-48
作者简历  48

抗副猪嗜血杆菌猪源化嵌合抗体的构建、表达及其活性鉴定

内容摘要

全文目录

相似论文