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黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶的制备及其对创伤修复和疤痕抑制的研究

作　者: 陈希
导　师: 高建青
学　校: 浙江大学
专　业: 药学
关键词: 黄芪甲苷 固体脂质纳米粒凝胶 创伤愈合 疤痕抑制
分类号: R944
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：通过筛选适宜的中药单体,进一步制备以固体脂质纳米粒凝胶为载体的中药单体的局部给药体系,探讨其创伤治疗和疤痕抑制的作用及其相关机制,以期达到无疤痕的创伤治疗效果。方法：1.通过细胞实验和动物预实验,筛选适宜的中药单体黄芪甲苷,并对黄芪甲苷的创伤治疗效果进行考察；2.采用溶剂蒸发法制备黄芪甲苷固体脂质纳米粒,并将其加入卡波姆凝胶基质制备固体脂质纳米粒凝胶,对粒径、电位、包封率、粒子形态、制剂流变学和药物释放行为等进行了考察；3.在体外细胞实验中,考察了黄芪甲苷固体脂质纳米粒的毒性以及细胞对药物的摄取能力。体内创伤实验中,考察了黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶对创伤的治疗效果,采用马森三色染色,天狼猩红染色,扫描电镜,测定修复皮肤内的TGF-β1的含量等方式验证黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶的创伤修复效果。结果：1.黄芪甲苷可显著促进角化细胞的迁移,促进新生皮肤的血管生成,增加皮肤力学强度,从而促进创伤的修复。天狼猩红染色和酶联免疫法表明,黄芪甲苷可降低Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的比例,降低成纤维细胞对TGF-β1的分泌。2.通过处方优化,所制备的固体脂质纳米粒形态圆整,包封率为93%±5%,Zeta电位为23.6mV±1.5mV,具有较好的粒径分布,其多分散系数(PDI)为0.18±0.03,药物的载药量达9%。将固体脂质纳米粒复合于凝胶中不会改变纳米粒子的形态和结构。药物在固体脂质纳米粒和固体脂质纳米粒凝胶中均表现出了良好的缓释行为。固体脂质纳米粒凝胶表现出了较好的触变性,适宜局部给药应用。3.黄芪甲苷固体脂质纳米粒在成纤维细胞上无毒性,并能增加成纤维细胞以小窝凹陷的方式摄取药物。在体内创伤治疗实验中,黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶能加快创伤的愈合,促进胶原的有序排列及血管的生成。结论：黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶可作为优良的局部给药体系,促进创伤修复同时抑制疤痕的形成。

全文目录


致谢  4-6
摘要  6-8
Abstract  8-10
中英文对照表  10-17
绪论  17-20
第一章 具有创伤治疗效果的中药单体的筛选  20-37
  1.1 试剂与器材  20-21
    1.1.1 实验材料和仪器  20
    1.1.2 仪器  20
    1.1.3 实验动物  20-21
  1.2 实验方法  21-25
    1.2.1 动物预实验  21
    1.2.2 具有创伤治疗效果的中药单体在皮肤细胞上的篩选  21-22
      1.2.2.1 人皮肤正常成纤维细胞的培养  21
      1.2.2.2 MTT实验  21-22
    1.2.3 黄芪甲苷溶液的药理学研究  22-25
      1.2.3.1 体外研究  22-24
        1.2.3.1.1 细胞凋亡实验  22-23
        1.2.3.1.2 对人皮肤正常成纤维细胞分泌TGF β1蛋白的影响  23
        1.2.3.1.3 细胞划伤愈合实验  23-24
      1.2.3.2 体内实验  24-25
        1.2.3.2.1 创伤修复速率  24
        1.2.3.2.2 血管生成  24
        1.2.3.2.3 张力实验  24
        1.2.3.2.4 组织染色  24-25
  1.3 实验结果与讨论  25-35
    1.3.1 动物预实验  25-26
    1.3.2 皮肤细胞上中药单体的MTT实验结果  26-27
    1.3.3 黄芪甲苷溶液的药理学研究  27-35
      1.3.3.1 体外研究  27-31
        1.3.3.1.1 细胞凋亡实验  27-29
        1.3.3.1.2 对人皮肤正常成纤维细胞分泌TGF β 1蛋白的影响  29-30
        1.3.3.1.3 细胞划伤愈合实验  30-31
      1.3.3.2 体内实验  31-35
        1.3.3.2.1 创伤修复速率  31-32
        1.3.3.2.2 张力实验  32-33
        1.3.3.2.3 皮肤血管新生结果  33-34
        1.3.3.2.4 组织染色  34-35
  1.4 小结  35-37
第二章 黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶的制备  37-53
  2.1 试剂与器材  37
    2.1.1 实验材料  37
    2.1.2 仪器  37
  2.2 实验方法与步骤  37-41
    2.2.1 处方前研究工作  37-39
      2.2.1.1 黄芪甲苷体外分析方法学的建立  37-38
        2.2.1.1.1 色谱条件  37-38
      2.2.1.2 分析方法学的验证  38-39
        2.2.1.2.1 标准曲线的建立  38
        2.2.1.2.2 精密度实验  38
        2.2.1.2.3 稳定性实验  38
        2.2.1.2.4 回收率实验  38-39
          2.2.1.2.4.1 黄芪甲苷在固体脂质纳米粒中的回收率实验  38
          2.2.1.2.4.2 黄芪甲苷在固体脂质纳米粒凝胶中的回收率实验  38-39
    2.2.2 黄芪甲苷固体脂质纳米粒和黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶的制备  39-41
      2.2.2.1 固体脂质纳米粒的制备和处方筛选  39
      2.2.2.2 固体脂质纳米粒凝胶制备  39-40
      2.2.2.3 固体脂质纳米粒和固体脂质纳米粒凝胶的扫描电镜观察  40
      2.2.2.4 固体脂质纳米粒凝胶的流变学分析  40
      2.2.2.5 固体脂质纳米粒和固体脂质纳米粒凝胶的释放行为考察  40
      2.2.2.6 固体脂质纳米粒冷冻干燥行为考察  40
      2.2.2.7 固体脂质纳米粒稳定性考察  40-41
      2.2.2.8 固体脂质纳米粒凝胶的稳定性考察  41
  2.3 实验结果与讨论  41-51
    2.3.1 处方前研究工作  41-45
      2.3.1.1 黄芪甲苷体外分析方法学的建立  41
      2.3.1.2 分析方法学的验证  41-45
        2.3.1.2.1 专属性验证  41-42
        2.3.1.2.2 标准曲线的建立  42-43
        2.3.1.2.3 精密度实验  43
        2.3.1.2.4 稳定性实验  43-44
        2.3.1.2.5 回收率实验  44-45
          2.3.1.2.5.1 黄芪甲苷在固体脂质纳米粒中的回收率实验  44
          2.3.1.2.5.2 黄芪甲苷在固体脂质纳米粒凝胶中的回收率实验  44-45
    2.3.2 黄芪甲苷固体脂质纳米粒和黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶的制备  45-51
      2.3.2.1 固体脂质纳米粒的制备和处方筛选  45-47
      2.3.2.2 固体脂质纳米粒及固体脂质纳米粒凝胶的扫描电镜  47-48
      2.3.2.3 固体脂质纳米粒凝胶的流变学分析  48
      2.3.2.4 固体脂质纳米粒的释放行为考察  48-50
      2.3.2.5 固体脂质纳米粒冷冻干燥行为考察  50
      2.3.2.6 固体脂质纳米粒的稳定性考察  50-51
      2.3.2.7 固体脂质纳米粒凝胶的稳定性考察  51
  2.4 小结  51-53
第三章 固体脂质纳米粒凝胶的药效学研究  53-70
  3.1 试剂与器材  53-54
    3.1.1 实验材料和仪器  53
    3.1.2 仪器  53
    3.1.3 实验动物  53-54
  3.2 实验方法  54-58
    3.2.1 固体脂质纳米粒的体外研究  54-55
      3.2.1.1 MTT实验  54
      3.2.1.2 固体脂质纳米粒的摄取  54-55
      3.2.1.3 固体脂质纳米粒的划伤实验  55
    3.2.2 黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶的创伤修复实验  55-58
      3.2.2.1 创伤修复  55-56
      3.2.2.2 组织切片染色  56
      3.2.2.3 扫描电镜  56-57
      3.2.2.4 组织匀浆测定组织中的TGF-β 1含量  57
      3.2.2.5 CD31免疫组织化学染色  57
      3.2.2.6 皮肤刺激性实验  57-58
    3.2.3 黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶的创伤(2.5cm~*2.5cm)修复实验  58
  3.3 实验结果与讨论  58-69
    3.3.1 固体脂质纳米粒的体外研究  58-61
      3.3.1.1 MTT实验  58-59
      3.3.1.2 固体脂质纳米粒的摄取  59-60
      3.3.1.3 固体脂质纳米粒的划伤实验  60-61
    3.3.2 黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶的创伤修复实验  61-67
      3.3.2.1 创伤修复  61-62
      3.3.2.2 马森三色染色  62-63
      3.3.2.3 扫描电镜  63-64
      3.3.2.4 TGF-β 1测定  64-65
      3.3.2.5 天狼握红染色结果  65-66
      3.3.2.6 CD31免疫组化  66
      3.3.2.7 皮肤刺激性  66-67
    3.3.3 黄芪甲苷固体脂质纳米粒凝胶的在2.5cm~*2.5cm创伤修复实验  67-69
      3.3.3.1 创伤愈合率  67
      3.3.3.2. 马森三色染色  67-68
      3.3.3.3. 扫描电镜观察胶原排列  68-69
  3.4 小结  69-70
全文总结  70-71
参考文献  71-78
综述  78-115
  References  106-115
作者简介  115
发表文章  115-116
参加学术会议  116
国家发明专利  116

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药剂学 > 剂型
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