学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

电针对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的治疗作用及机制研究

作　者: 程井军
导　师: 孙国杰
学　校: 湖北中医学院
专　业: 针灸推拿学
关键词: 电针非酒精性脂肪性肝炎大鼠氧化应激核转录因子-κB 过氧化物酶体增殖物激活受体r
分类号: R245.97
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
下　载: 139次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的随着社会的发展及人民生活水平的不断提高，非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)发病逐渐增多。其病理机制较为复杂，至今尚未完全阐明。其中，游离脂肪酸过多、氧化应激、细胞因子相关性损害等是其重要的病理环节。已有的临床和实验研究表明，脂肪性肝炎与NF-κB、PPAR r的相关性研究文献较少，有必要深入研究，进一步阐明核因子-κB(nuclear factorKappa B NF-κB)、过氧化物酶体增殖物激活受体r(peroxisome prolifera-tor-activated receptor gamma，PPAR r)与NASH之间的关系。NASH尚无理想的治疗药物。中医药在治疗NASH方面具有一定的优势。导师孙国杰教授根据长期临床实践，认为NASH多因长期过食肥甘、体胖少动、七情内伤，致脾失健运，肝失疏泄，痰湿内聚，郁久化热，阴精暗耗，终至形成本虚标实的病理特点。治宜补益肝肾、健脾利湿、化痰逐瘀，穴选肝俞、足三里、丰隆、太冲。我们应用电针刺激患者肝俞、足三里、丰隆、太冲治疗非酒精性脂肪性肝炎，发现电针具有明显的改善非酒精性脂肪性肝炎患者的临床症状、改善肝功能、降低血脂及抗肝纤维化的作用，对非酒精性脂肪性肝炎治疗有较好的临床疗效。本课题采用国内外公认的经典NASH动物模型，结合已有的关于NASH的研究成果，用病理学、生物化学、分子生物学等技术，探讨NASH状态下肝组织NF-κB和PPARrmRNA的表达情况，阐明电针治疗NASH的作用机制，为临床应用电针治疗NASH提供科学依据。方法将48只SD大鼠称重标记后按随机数字表随机分为2组：正常对照组12只；造模组36只。正常对照组采用普通饲料喂养；造模组采用高脂饲料喂养。实验依据范建高经典造模方法(标准饲料的基础上加2％胆固醇、13％猪油)复制NASH动物模型。12周后，从正常对照组随机抽取2只，造模组随机抽取6只，肝脏病理切片证实造模成功后，取剩余30只造模组大鼠称重，再随机分为模型组10只，电针组10只，药物组10只。正常组不进行电针和药物治疗，同前普通饲料喂养4周；模型对照组，不进行电针和药物治疗，同前高脂饲料喂养4周。针刺组取穴参照新世纪全国高等中医药院校规划教材《实验针灸学》大鼠针灸穴位定位方法及拟人比照法定位，选取双侧肝俞、足三里、丰隆、太冲，自第12周开始每天治疗1次，连续6天后休息1天，共治疗4周；药物组，自第12周开始每天以西药熊去氧胆酸(UDCA)250mg／kg．d的水溶液灌胃，继前高脂饲料喂养4周。各组大鼠在实验第16周隔夜空腹以2％戊巴比妥钠按2ml／kg量麻醉，经下腔静脉采血，迅速按常规分离血清；摘取肝脏。观察动物体重、食欲、行为、状态、毛发及死亡情况，计算肝指数(肝脏湿重／体重×100％)；采用Olympus Au560全自动生化分析仪测定血清ALT、AST、TG、TC、FFA、空腹血糖(fasting blood glucose，FBG)；放射免疫分析法测定TNF-α、空腹血清胰岛素(fasting Insulin，FNS；计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR=FBGx FINS)／22.5)；肝组织匀浆生化测定MDA、SOD；电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NF-KB活性；采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测PPARrmRNA；将肝组织用4℃生理盐水冲洗，在肝脏最大叶距边缘5mm处取小块肝组织，中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察肝组织普通病理变化。另取1mm~3肝组织，2.5％戊二醛及1％锇酸双固定，梯度酒精脱水，环氧树脂包埋，超薄切片，HITACHI H7500透射电镜下观察肝细胞超微结构变化。结果1成功复制大鼠NASH模型。与空白模型组相比，电针组大鼠肝指数明显降低(P＜0.05)，炎症活动程度皆有明显改善(P＜0.05)；血清ALT、AST明显降低(P＜0.05)。除正常对照组外各组大鼠肝组织均表现有不同程度的脂肪变性、炎症、坏死。电针组肝组织脂肪变性及炎症程度明显减轻，肝组织形态结构改善。2模型组血清TG、TC、FFA水平比正常组显著增高(P＜0.05)；模型组比电针组显著增高(P＜0.05)；电针组血清TG、TC水平较之药物组有下降趋势，但二者比较无明显差异(P＞0.05)；药物组血清FFA水平较之电针组有下降趋势，但二者比较无明显差异(P＞0.05)。3模型组肝组织MDA含量显著高于正常组(P＜0.05)，SOD活性显著低于正常组(P＜0.05)；电针组与模型组比较，MDA含量显著降低(P＜0.05)，而SOD活性明显升高(P＜0.05)；电针组与药物组比较，MDA含量有下降趋势，有统4计学差异(P＜0.05)；而SOD活性有下降趋势，但无统计学差异(P＞0.05)。4模型组血清TNF-α水平比正常组显著增高(P＜0.05)；电针组血清TNF-α水平比模型组显著降低(P＜0.05)；电针组血清TNF-α水平与药物组比较无明显差异(P＞0.05)。5模型组胰岛素抵抗指数水平比正常组显著增高(P＜0.05)；模型组比电针组增高(P＜0.05)；电针组与药物组比较无明显差异(P＞0.05)。6模型组和药物组的NF-KB活性明显高于正常对照组(P值均＜0.01)和电针组(P值均＜0.05)。模型组、电针组和药物组大鼠肝组织PPAR rmRNA的表达均较正常对照组有不同程度的减弱(P值均＜0.01)，模型组大鼠肝组织PPAR rmRNA的表达明显低于电针组(P＜0.01)。结论氧化应激进而引起脂质过氧化和肝损伤，最终引起前炎症细胞因子产生，启动肝脏炎症反应；在NASH状态下NF-κB活性增强、PPAR rmRNA表达减弱，显示了三者之间的相关性。电针具有多靶位治疗NASH的作用：①电针能明显降低NASH大鼠肝指数，改善肝组织脂肪变性、炎症活动程度及肝功能。②电针能降低血清脂质水平、减轻FFA的肝脏毒性、改善肝脏对脂质代谢的调节、减轻肝脏炎症反应。③电针能够提高肝组织抗氧化能力，减轻脂质过氧化。④电针能降低TNF-α的表达，减少细胞因子相关性损害。⑤电针能改善NASH大鼠IR状态。⑥电针能够抑制NF-KB的活性、促进PPARrmRNA表达。电针治疗NASH的作用可能是通过腧穴-经络-脏腑相关性及神经-内分泌-免疫网络整体调节实现的。

全文目录

中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
英文缩写词表  11-12
前言  12-14
实验Ⅰ:电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织病理及肝功能改变的影响  14-27
  1 材料与方法  15-17
  2 结果  17-23
  3 讨论  23-25
  参考文献  25-27
实验Ⅱ:电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血脂水平的影响  27-33
  1 材料与方法  27-28
  2 结果  28-29
  3 讨论  29-31
  参考文献  31-33
实验Ⅲ:电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织氧化及抗氧化状态的影响  33-39
  1 材料与方法  33-34
  2 结果  34-35
  3 讨论  35-37
  参考文献  37-39
实验Ⅳ:电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清肿瘤坏死因子-α表达的影响  39-43
  1 材料与方法  40
  2 结果  40-41
  3 讨论  41-42
  参考文献  42-43
实验Ⅴ:电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠胰岛素抵抗指数水平的影响  43-48
  1 材料与方法  44
  2 结果  44-45
  3 讨论  45-47
  参考文献  47-48
实验Ⅵ:电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织核转录因子-κB活性及PPARrmRNA表达的影响  48-56
  1 材料与方法  49-51
  2 结果  51-53
  3 讨论  53-54
  参考文献  54-56
讨论与结论  56-88
  参考文献  78-88
文献综述Ⅰ  88-104
文献综述Ⅱ  104-119
在校期间发表论文及申报课题情况  119-120
致谢  120

电针对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的治疗作用及机制研究

内容摘要

全文目录

相似论文