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混合HSPs/肽复合物疫苗与白细胞介素12、低剂量环磷酰胺联合免疫治疗小鼠肿瘤的动物实验研究

作　者: 宋舸
导　师: 卢世璧；袁玫
学　校: 中国人民解放军军医进修学院
专　业: 骨外科
关键词: 肿瘤疫苗 混合热休克蛋白/肽 白细胞介素-12 蛋白纯化 免疫治疗
分类号: R730.5
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


肿瘤的免疫治疗是肿瘤的第四大疗法之一，在实验研究的基础上刚刚进入临床应用，展现了提高肿瘤治疗水平的前景，目前，仍围绕着肿瘤的抗原性及机体的抗肿瘤免疫应答这个肿瘤免疫学的核心问题进一步深入。自从1984年，Srivastava等首先报道了从肿瘤细胞中纯化的HSP制剂具有激发保护性的抗肿瘤的细胞免疫反应，随着研究的深入，发现单用纯化的HSPs／P还不足以完全排斥肿瘤。因为肿瘤抗原具有多样性，而混合的热休克蛋白携带有多种肿瘤抗原，从综合治疗的角度出发，本研究首次提出将混合性热休克蛋白疫苗与具有瘤苗增强效应的IL-12和能选择性的去除抑制性T细胞(Tregular，Treg)的低剂量Cy联合应用，期望取得更好的肿瘤治疗效果，并对其免疫学机理进行了研究。在S180肉瘤动物模型取得免疫预防效果的基础上，本实验研究以mHSPs／P(含有HSP60、HSP70、gp96)为疫苗，进行了mHSPs／P预防免疫小鼠MCA207肉瘤、Lewis肺癌的实验研究；为进一步提高其治疗性免疫效果，进行了mHSPs／P联合低剂量Cy和IL-12免疫治疗小鼠S180肉瘤、Lewis肺癌的实验研究，并深入探讨了mHSPs／P激活抗肿瘤作用的免疫机理。结果表明：1．应用分子筛层析方法提取肿瘤组织内部的混合热休克蛋白，经鉴定含有HSP60、HSP70和gp96。2．mHSPs／P联合低剂量Cy和IL-12强化免疫治疗荷S180瘤小鼠，有明显的治疗肿瘤作用，治疗3个月后8／10肿瘤完全消退。100％抑制了肿瘤的肺转移，抑瘤生长率达92％。3．mHSPs／P、低剂量Cy和IL-12联合强化免疫治疗后的S180小鼠脾致敏T淋巴细胞分泌IFN-γ的水平升高，对S180细胞的杀伤作用随效靶比升高而升高，外周血的NK细胞水平升高。且均高于单用mHSP／P组。在免疫后的肿瘤组织中有大量白细胞浸润，表明mHSP／P免疫后产生了免疫预存，从而发挥了IL-12的强大杀伤作用。这些是本联合免疫方案产生良好治疗作用的基础。为确证本联合免疫治疗方案中mHSPs／P疫苗的作用，我们选用小鼠肉瘤MCA207模型单用mHSPs／P预防性免疫，也有明显的主动免疫预防效果，无瘤生存率达50％，略高于S180模型(41.2％)。单用mHSPs／P预防免疫Lewis肺癌小鼠效果不如MCA207，60天无瘤生存率为20％。然而，应用mHSPs／P联合低剂量Cy和IL-12方案对小鼠Lewis肺癌进行治疗性免疫时，效果不够理想，治疗后1／5肿瘤完全消退，对此进行了讨论分析，并对进一步提高本免疫治疗方案提出了设想。本实验结论如下：1．我们所制备mHSPs／P的技术平台可一次性提取多种HSP／P，具有快速、有效、经济的特点。2．单用mHSPs／P疫苗在小鼠MCA207肉瘤模型中有良好的预防性免疫防治效果，产生了特异性免疫保护作用，而对异种肿瘤无保护作用。3．单用mHSPs／P防治小鼠lewis肺癌，效果不如MCA207；4．mHSPs／P联合Cy及IL-12治疗S180肉瘤小鼠，80％的荷瘤鼠肿瘤消退，长期无瘤存活。mHSPs／P、CY、IL-12联合免疫治疗小鼠lewis肺癌，20％的荷瘤鼠长期无瘤存活。5．mHSPs／P或mHSPs／P、CY、IL-12联合免疫S180小鼠的脾T淋巴细胞在体外可因mHSPs／P的刺激扩增增殖，并杀伤肿瘤细胞；杀伤率随效靶比增加而升高；NK细胞明显升高，IFN-γ明显升高，且mHSPs／P、CY、IL-12联合免疫组高于单用mHSPs／P组，表明经过mHSPs／P、Cy及IL-12强化免疫治疗的小鼠表现出更强的特异和非特异性杀伤作用。这种mHSP／P疫苗的制备及其综合免疫治疗效果在国内外尚未见报道，已申请专利(专利号：200510135247.5)，可望在临床有广泛的应用前景。

全文目录


英文缩略词  6-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-16
第一部分 混合HSP/肽复合物分离、纯化、鉴定  16-28
  一 前言  16
  二 材料与方法  16-25
    (一) 主要试剂  16-18
    (二) 主要仪器  18
    (三) 主要试剂配制  18-22
    (四) 方法与步骤  22-25
  三 结果  25-26
  四 讨论  26-28
第二部分 混合HSP/肽复合物疫苗对小鼠MCA270肉瘤免疫预防实验观察  28-35
  一 前言  28
  二 材料与方法  28-30
    (一) 主要试剂  28
    (二) 主要仪器  28
    (三) 主要试剂配制  28
    (四) 方法与步骤  28-29
    (五) 统计分析  29-30
  三 结果  30-31
  四 讨论  31-35
第三部分 混合HSPs/肽复合物疫苗联合低剂量环磷酰胺、IL-12对小鼠S180肉瘤强化免疫治疗实验观察  35-46
  一 前言  35
  二 材料与方法  35-39
    (一) 主要试剂  35
    (二) 主要仪器  35-36
    (三) 主要试剂配制  36-37
    (四) 方法与步骤  37-38
    (五) 统计分析  38-39
  三 结果  39-40
  四 讨论  40-46
第四部分 混合HSPs/P 疫苗联合低剂量环磷酰胺、IL-12对小鼠S180肉瘤强化免疫治疗的机理研究  46-56
  一 前言  46
  二 材料与方法  46-52
    (一) 主要试剂  46-47
    (二) 主要仪器  47-48
    (三) 主要试剂配制  48-50
    (四) 方法与步骤  50-52
    (五) 统计分析  52
  三 结果  52-53
  四 讨论  53-56
第五部分 mHSPs/P疫苗对小鼠Lewis肺癌模型免疫治疗实验观察  56-61
  一 前言  56
  二 材料与方法  56-58
  三 结果  58-59
  四 讨论  59-61
小结  61-62
参考文献  62-65
附图  65-82
文献综述  82-102
攻读学位期间发表的文章  102-103
致谢  103-104

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤治疗学
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