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羽衣甘蓝游离小孢子培养体系的构建及应用

作　者: 姜凤英
导　师: 冯辉
学　校: 沈阳农业大学
专　业: 蔬菜学
关键词: 羽衣甘蓝 游离小孢子培养 胚状体 植株再生 倍性鉴定
分类号: S635.9
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
下　载: 635次
引　用: 6次
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内容摘要


为建立高效的羽衣甘蓝游离小孢子培养体系，加快育种材料纯化，以10个羽衣甘蓝杂交种为试材，采用游离小孢子培养方法，研究了培养基和培养条件对胚状体发生、发育和再生植株的影响，探讨了小孢子植株倍性鉴定方法及加倍技术，对获得的双单倍体植株的园艺学性状进行了鉴定，获得了下列试验结果。 1．不同基因型材料适宜取样花蕾的大小有一定的差异。多数品种适宜取蕾长度为3.0～4.5mm；花瓣与花药长度之比为4／5～7／6，选择圆形小孢子占绝大多数的花蕾进行游离小孢子培养较适合。 2．基因型是影响羽衣甘蓝小孢子胚诱导的关键因素之一。在10个供试基因型材料中，有7个基因型的胚状体诱导获得成功。小孢子胚诱导率最高的品种“Y009”出胚率达0.88胚·蕾-1。 3．植物生长调节剂对小孢子胚发生及发育有一定影响。6-BA对诱导小孢子胚有促进作用，适宜浓度为0.2mg·L-1；NAA抑制小孢子胚状体发生，但能促进其发育，提高正常胚比例；2，4-D对诱导胚状体发生有较强的抑制作用；6-BA和NAA协调作用能显著提高胚状体诱导率，有利于萌发胚和子叶形胚的发生，适宜的浓度比为1：1或2：1。 4．琼脂糖和活性炭对小孢子胚发生和发育有促进作用，对难成胚基因型的作用效果尤为显著，适宜添加量为每皿添加0.5g·L-1的琼脂糖和10g·L-1的活性炭混合液100μL。 5．花蕾4℃低温预处理能提高小孢子胚诱导率。该影响在“Y009”上表现不显著，但可以暂时保存材料而不降低培养效果。 6．游离小孢子33℃高温预处理，可以改变小孢子发育方向，使其由配子体发育途径转向孢子体发育途径，并使小孢子维持较高的活细胞频率，促进细胞分裂和胚状体发生。处理时间以24h为宜。 7．盛花期花蕾样品成胚率高，其次为初花期。末花期花蕾样品进行游离小孢子培养未获得胚状体。 8．培养基最适的蔗糖浓度为13％。 9．小孢子胚成苗能力与胚状体发育时期有关。萌发胚、子叶形胚的成苗率较高，分别为85.71％和56.25％；鱼雷形胚成苗率为28.57％；心形胚和球形胚成苗率仅为9.76％；畸形胚不能成苗。 10．胚状体成苗培养以琼脂含量为1.0％的MS培养基为宜。 11．活性炭对子叶形胚成苗无明显作用，但有利于鱼雷形胚成苗，适宜的活性炭添加量为100mg·L-1。

全文目录


摘要  11-13
英文摘要  13-16
前言  16-17
第一章 文献综述  17-36
  一、小孢子培养的意义  17-18
  二、小孢子培养的研究概况  18-20
  三、影响小孢子培养成功的因素  20-35
    (一) 外植体对胚状体发生的影响  21-24
    (二) 培养条件对胚状体发生的影响  24-30
    (三) 胚诱导再生植株的相关研究  30-35
  四、存在问题与展望  35-36
第二章 羽衣甘蓝小孢子培养胚状体发生及发育的研究  36-55
  一、材料与方法  36-39
    (一) 试验材料  36-37
    (二) 试验方法  37-39
  二、结果与分析  39-53
    (一) 花蕾大小与小孢子发育时期的关系  39-44
    (二) 基因型对小孢子胚诱导率的影响  44-45
    (三) 植物生长调节剂对小孢子胚状体形成及发育的影响  45-49
    (四) 琼脂糖和活性炭对小孢子胚状体形成及发育的影响  49-51
    (五) 低温预处理对小孢子胚诱导率的影响  51
    (六) 高温预处理对小孢子胚诱导率的影响  51-52
    (七) 取材时期对小孢子胚诱导率的影响  52
    (八) 碳源对小孢子胚诱导率的影响  52-53
  三、小结  53-55
第三章 羽衣甘蓝小孢子胚成苗影响因素研究  55-61
  一、材料与方法  55-56
    (一) 试验材料  55
    (二) 试验方法  55-56
  二、结果与分析  56-60
    (一) 胚状体在成苗培养基上的形态发育  56
    (二) 培养基中水分含量对胚状体成苗的影响  56-57
    (三) 基本培养基对胚状体成苗的影响  57
    (四) 胚状体发育状态对成苗的影响  57-58
    (五) 活性炭对胚状体成苗的影响  58-59
    (六) 不同品种对胚状体成苗的影响  59
    (七) 低温培养天数对胚状体成苗的影响  59-60
  三、小结  60-61
第四章 羽衣甘蓝小孢子试管苗的继代培养和生根移栽  61-67
  一、材料与方法  61-63
    (一) 试验材料  61
    (二) 试验方法  61-63
  二、结果与分析  63-66
    (一) 小孢子试管苗的继代培养  63-64
    (二) 小孢子试管苗的壮苗培养  64
    (三) 小孢子试管苗的生根诱导  64-65
    (四) 小孢子植株的移栽  65-66
  三、小结  66-67
第五章 羽衣甘蓝小孢子植株倍性鉴定方法研究  67-73
  一、材料与方法  67-69
    (一) 试验材料  67
    (二) 试验方法  67-69
  二、结果与分析  69-72
    (一) 不同倍性小孢子植株的形态特征  69
    (二) 小孢子植株叶片气孔特征与倍性的关系  69-70
    (三) 花粉生活力的观测  70-71
    (四) 花粉母细胞染色体记数  71
    (五) 根尖染色体记数  71
    (六) 自交结实情况  71-72
  三、小结  72-73
第六章 羽衣甘蓝小孢子单倍体植株人工加倍技术研究  73-77
  一、材料与方法  74
    (一) 试验材料  74
    (二) 试验方法  74
  二、结果与分析  74-76
    (一) 染色体自然加倍  74-75
    (二) 秋水仙素结合组织培养诱导的单倍体加倍  75-76
  三、小结  76-77
第七章 羽衣甘蓝双单倍体植株育种潜力研究  77-80
  一、材料与方法  77-78
    (一) 试验材料  77
    (二) 试验方法  77-78
  二、结果与分析  78-79
    (一) 羽衣甘蓝双单倍体植株园艺学性状  78
    (二) 羽衣甘蓝双单倍体植株自交亲和性鉴定  78-79
    (三) 杂交组合的试配  79
  三、小结  79-80
讨论  80-87
  一、外植体对小孢子胚状体发生的影响  80-81
  二、培养条件对小孢子胚状体发生的影响  81-83
  三、提高小孢子胚再生植株能力的方法  83-84
  四、影响小孢子再生植株成活率的因素  84
  五、小孢子植株的加倍方法  84-85
  六、小孢子植株的倍性鉴定方法  85-86
  七、双单倍体植株的育种价值  86
  八、本项研究的后续工作  86
  九、本项研究的创新之处  86-87
结论  87-89
参考文献  89-100
图版  100-111
致谢  111-112
攻读学位论文期间发表文章  112

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 蔬菜园艺 > 甘蓝类 > 其他
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