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显微注射法建立HCV 5\'NCR和C区转基因细胞模型以及核酶细胞内抑制HCV基因表达作用的研究

作　者: 焦成松
导　师: 周永兴；朱德生；贾战生
学　校: 第四军医大学
专　业: 传染病学
关键词: 丙型肝炎病毒细胞模型荧光素酶核酶
分类号: R512.6
类　型: 博士论文
年　份: 2000年
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内容摘要

丙型肝炎病毒(HCV)是输血后肝炎的主要病原，目前尚缺乏理想的抗HCV治疗药物。基因治疗是一类新的很有希望的抗病毒治疗方法。HCV仅能感染人和猩猩，体外培养也远未成功，如何建立可定量检测的HCV细胞模型，便成为开展抗HCV基因治疗研究的关键环节。显微注射技术与其他细胞基因转染方法比较，至少有两大优势，一是能进行单个细胞的转染，易于细胞转染后的克隆化；二是直接向细胞核内导入线性化的基因片段，既可避免胞浆内核酸酶对外源基因的破坏，也有利于外源基因的单拷贝整合。本研究旨在应用细胞核显微注射技术，转染HCV5′NCR和C区基因片段，建立可连续传代的含报告基因的HCV基因整合细胞模型，并进一步开展抗HCV基因治疗研究。核酶(Rz)是抗病毒基因治疗的重要手段之一。锤头结构Rz分子较小、结构简单、易于设计合成，作为新的抗病毒治疗手段，已在多种病毒的基因治疗研究中显示出潜在的应用价值。本研究选择两个针对HCV 5′NCR和C区的锤头结构Rz，通过显微注射法建立的含荧光素酶报告基因(luc)的HCV转基因细胞模型，在细胞水平研究Rz对HCV基因表达的抑制作用。主要研究内容如下： 1 应用NARISHIGE MO-204型显微操作仪，向体外培养的SMMC-7721细胞进行单细胞显微注射，胞浆内注射HCV C蛋白或胞核内注射线性化的

全文目录

英文缩写词  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
前言  12-14
文献回顾  14-56
  Ⅰ.丙型肝炎病毒细胞模型研究进展  14-26
  Ⅱ.丙型肝炎病毒C蛋白研究进展  26-32
  Ⅲ.抗病毒核酶的研究进展  32-56
实验部分  56-105
  第一部分显微注射技术的探讨  56-71
    Ⅰ.细胞浆显微注射——丙型肝炎病毒C蛋白诱导肿瘤细胞凋亡作用的初步研究  57-65
      1 材料  57-58
      2 方法  58-60
      3 结果  60-62
      4 讨论  62-65
    Ⅱ.细胞核显微注射——乙型肝炎病毒S基因经显微注射导入SMMC-7721细胞核内的表达  65-71
      1 材料和方法  65-67
      2 结果  67-68
      3 讨论  68-71
  第二部分丙型肝炎病毒5’NCR转基因细胞模型的建立  71-78
    1 材料和方法  71-75
    2 结果  75
    3 讨论  75-78
  第三部分含报告基因的HCV C区转基因细胞模型的建立  78-91
    1 材料  78-80
    2 方法  80-85
    2 结果  85-88
    3 讨论  88-91
  第四部分核酶细胞内对HCV基因表达的抑制作用  91-105
    1 材料  91-93
    2 方法  93-97
    3 结果  97-101
    4 讨论  101-105
小结  105-106
致谢  106-107
附录1 论文图片  107-111
附录2 个人简历  111-113
附录3 在读期间发表文章及参编专著题录  113-114

显微注射法建立HCV 5\'NCR和C区转基因细胞模型以及核酶细胞内抑制HCV基因表达作用的研究

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