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人热休克蛋白HSP90α基因的转录调控机制的研究

作　者: 张书岭
导　师: 沈珝琲；吴宁华
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 分子生物学及生物化学
关键词: 博士研究生热休克蛋白第一内含子医科大学毕业论文热诱导调控机制协和报告基因基础表
分类号: Q987
类　型: 博士论文
年　份: 1996年
下　载: 98次
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内容摘要

细胞在热刺激下可产生一类保守的蛋白质，这类蛋白质称为热休克蛋白(heat shock protein，HSP)，这种因受热而产生HSP的现象在生物界普遍存在。热休克蛋白已发现20多年，它们依据其分子量的大小和同源性可大致分为HSP110，90，70，60，40，小分子HSP和泛素等几类。HSP90在细胞内是组成性表达的，并且在热休克和其它应激刺激条件下被进一步诱导增强表达，它的基因是少数含有内含子的热休克蛋白基因(heat shock gene,hsp)之一。HSP90在细胞内可以与许多具有特殊结构和功能的蛋白质以“分子伴侣(molecular chaperone)”的形式发挥作用，例如与类固醇激素受体、酪氨酸激酶、酪蛋白激酶Ⅱ、eIF2-α和许多癌基因产物结合，广泛参与细胞的生长、发育、分化及其在应激条件下对细胞的保护等生理过程，因此又有“特异分子伴侣”之称。研究它的基因表达调控不仅有助于对其生理功能进一步地了解，而且也可为真核基因诱导表达调控机制的研究建立一个良好的模型。编码人HSP90的基因有两个拷贝即hsp90α和hsp90β。本组近十余年来一直对这两种基因的诱导表达进行着系统的研究，发现人hsp90受热和丝裂原的双重诱导，其表达调控主要表现在转录水平上，并且发现它们对两种诱导因素表现的表达动力学也有所不同。研究hsp90β的转录调控发现其第一内含子是热诱导调控的主要元件，5’上游序列参与基础表达，而对热诱导的调节作用不明显。遗憾的是，由于hsp90α 5’上游的已知序列仅有280bp，并且在此区域内的G／C含量很高(＞70％)，致使hsp90α的转录调控机制的研究至今尚未见有报导。我们在已知的常用内切酶切位点极少数情况下，以已知的5’上游280bp核苷酸序列为基础克隆到从转录起始点+1起的5’上游1756bp的DNA片段，并且利用PCR方法扩增到含人

全文目录

缩写词表  4-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-13
前言  13-16
材料与方法  16-30
结果  30-63
  第一部分：人hsp90α5′上游和第一内含子片段的获得、克隆、亚克隆及核苷酸序列测定  30-39
  第二部分：人hsp90α-1756／+527bp片段在氯霉素乙酰基转移酶报告基因真核表达载体上的亚克隆  39-45
  第三部分：人hsp90α-1756／+527bp片段转录调录活性检测  45-54
  第四部分：人hsp90α5′上游区近端和远端含有HSE的片段对热诱导转录活性协同调控的研究  54-60
  第五部分：hsp90在Jurkat细胞内的诱导表达以及两种hsp90相互协调表达和自身反馈调节的研究  60-63
讨论  63-74
小结  74-75
参考文献  75-79
附录  79-84
致谢  84-85
文献综述  85-114

人热休克蛋白HSP90α基因的转录调控机制的研究

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