学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

革兰氏阳性中度嗜盐菌响应渗透胁迫的差异蛋白质组学研究

作　者: 冯德芹
导　师: 杨苏声
学　校: 中国农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 达坂喜盐芽孢杆菌双向电泳质谱 (MALDI-TOF/MS)鉴定差异显示蛋白质组学高盐冲击低渗冲击长期高盐胁迫
分类号: Q936
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
下　载: 572次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载

内容摘要

达坂喜盐芽孢杆菌(Halobacillus dabanensis)D-8~T是一株分离自新疆达坂湖的革兰氏阳性中度嗜盐菌,能在0.5%～23%盐浓度的SW培养基上生长,最适生长盐浓度是3%～15%。为揭示革兰氏阳性中度嗜盐菌的耐盐机制,利用差异蛋白质组学研究技术,得到了高分辨率的双向电泳图谱。在电泳胶上清晰地分离出大约700个蛋白点,分子量为17.5～66kDa,等电点范围为3.5～5.9,表明D-8~T菌株中的蛋白质大多数属于酸性蛋白质。此外,大量的高丰度蛋白质集中在4.5～5.0的极窄范围的等电点区域,大多数的低丰度蛋白质分布在图谱的其他部分。利用蛋白质组学技术研究了D-8~T菌株受到剧烈的高盐冲击时的差异表达蛋白谱,鉴定了一些与高盐冲击相关的蛋白质。采用双向电泳分离技术和ImageMasterTM 2D Platinum图像软件分析方法,对在1%盐浓度下生长的D-8~T菌株(培养18h)和受到25%盐浓度的瞬间冲击5min和50min后的蛋白质表达谱进行比较研究的结果表明,高盐冲击后总计有74个蛋白点表达量显著改变,其中24个蛋白点在高盐下表达量明显增加,8个高盐诱导的新蛋白点,以及42个表达量显著下降的蛋白点.利用MALDI-TOF/MS检测肽质指纹谱和MASCOT检索蛋白质数据库,初步鉴定了7个高盐冲击后表达量增加的蛋白质,它们涉及信号传导途径(类CheY接受器)、能量代谢途径(草酰乙酸脱羧酶、烯醇酶)、热激蛋白和分子伴侣(Ⅰ类热激蛋白,有伴侣活性的ATP酶以及ClpC ATP酶)和抗逆蛋白(烯醇酶)等。此外,ClpC ATP酶是首次鉴定存在于革兰氏阳性中度嗜盐菌中。为了探讨D-8~T菌株受到低渗沖击时的差异表达蛋白,对生长在20%盐度下的D-8~T曲株(培养18h)受到剧烈的低渗冲击(0%盐度)5min和50min后的蛋白质表达谱进行了比较分析。结果显示,总计有39个蛋白点的表达量发生了明显改变,其中21个蛋白点的表达量明显增加(包括低渗冲击诱导出现的6个新蛋白点),18个蛋白点表达量受到抑制。经过质谱分析和数据库搜索,初步鉴定了5个低渗冲击后表达量增加的蛋白质,分别为形态检测蛋白、青霉素结合蛋白、DnaK、ClpC ATP酶和EPSPS等。此外,热激蛋白是首次鉴定在细菌受到低渗冲击时表达量增加的蛋白质。研究了D-8~T菌株在不同盐浓度下的蛋白质表达谱,发现133个蛋白点的表达量发生了明显改变。88个蛋白点在10%和20%的高盐度下表达量显著增加,包括26个高盐诱导出现的新蛋白点;45个蛋白点在高盐度下的表达量明显下降,其中包括20个表达消失的蛋白点(有16个蛋白点只是在1%盐度中生长的细胞中才表达)。从质谱分析和蛋白质数据库匹配结果来看,D-8~T菌株在高盐浓度下生长时,表达量明显增加的蛋白质主要有以下几类:与能量代谢相关的蛋白质、参与细胞生存和增殖的蛋白质、作为全局胁迫调节子适应多种胁迫条件的蛋白质、与亲和性溶质如海藻糖和甜菜碱可能相关的蛋白质等。

革兰氏阳性中度嗜盐菌响应渗透胁迫的差异蛋白质组学研究

内容摘要

全文目录

相似论文