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石斛类原球茎体增殖及ABA对其耐脱水性的诱导

作　者: 刘伟
导　师: 潘瑞炽；叶庆生
学　校: 华南师范大学
专　业: 植物学
关键词: 铁皮石斛金钗石斛组织培养脱水耐性超显微结构 ABA DD-RTPCR
分类号: S682.31
类　型: 博士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

本论文对金钗石斛和铁皮石斛的组织培养和ABA对铁皮石斛类原球茎脱水耐性的诱导及其机理研究进行了研究，主要结果如下：一．铁皮石斛和金钗石斛的组织培养 1．利用铁皮石斛成熟的种子为外植体，在无激素培养基上获得了无菌苗，在含有TDZ和NAA的1／2MS培养基上，诱导了铁皮石斛类原球茎，而6-BA的使用会导致材料进一步的分化。铁皮石斛类原球茎的增殖，以1／2MS+0.1mg／LNAA+3％蔗糖为佳，尽管在不含NAA的培养基上也有高的增殖率，但类原球茎的质量却较差。 2．金钗石斛的外植体以幼茎基部效果最好，腋芽易萌发，但材料数量少；以老茎为外植体时，接种前严格的清洗和预处理，能够有效地提高消毒效率，降低材料的污染。通过正交试验，对老茎腋芽萌发的研究表明，NAA和BA对腋芽的萌发都有一定促进作用，以0.1mg／L NAA和1mg／L BA混用效果最好，而GA抑制腋芽萌发。二．ABA对铁皮石斛类原球茎脱水耐性的诱导及机理研究 1．50 μ mol／L以下浓度的ABA预培养，都能够在一定程度上提高铁皮石斛类原球茎对脱水的耐性，其中以5 μ mol／L ABA的效果最佳，预培养时间以24h为好，经2h快速脱水后，成活率较对照提高10倍左右。 2．保护性溶质含量的测定结果表明，在24h内，ABA预培养并不能明显引起蔗糖、脯氨酸等物质的积累，但可溶性多糖的含量有一定程度的增加。因此，认为脱水耐性的增强，可能与可溶性多糖含量的增加有关。 3．显微结构观察发现，ABA预处理过程中，淀粉粒逐渐降解。证实ABA诱导的脱水耐性，可能与石斛多糖的积累相关。4 超显微结构的观察发现，ABA预培养不会引起叶绿体、线粒体及液泡的明显变化，但脱水后，经ABA预培养的抗性类原球茎，其膜系统的完好性明显强于未经ABA预培养的敏感性类原球茎。虽然在结构上，抗性类原球茎细胞中线粒体、叶绿体及液泡都出现一定程度的皱缩，但内外膜均保持较好，而在敏感材料的细胞中，线粒体、叶绿体膜的降解则较为严重。此外，预处理引起了细胞大范围的轻度质壁分离，对照中则未见。脱水后，抗性材料中质壁分离现象严重，但细胞结构基本保持完好，细胞膜完整，而对照细胞己经严重损伤，结构破坏，细胞膜己无祛清晰辨认。因而，我们认为这种由ABA引起的轻度的质壁分离，很可能与细胞生理状态的调整及对脱水的耐性相关。5．通过DD－RTPCR技术，在ABA预培养6h和 12h，共筛选出 116个差异条带，通过 Reverse Northern筛选及对部分差异片段的 Northern检验，从中得到了三个阳性片段，一个由ABA诱导表达，一个增加表达还有一个表达降低。6 在进行同源性分析时，发现以上阳性片段都无可以进行比较的同源基因，因此我们难于推断其可能的功能，但由于其与ABA对脱水耐性的诱导相关，进一步的研究很可能会获得非常有意义的结果。

全文目录

图片(铁皮石斛和金钗石斛)  5-9
缩写词表  9-10
中文摘要  10-12
英文摘要  12-14
第一章文献综述  14-23
  第一节石斛属概述  14-16
  第二节药用石斛研究概述  16-19
    1 药用石斛的种类  16-17
    2 药用石斛的栽培  17-18
    3 药用石斛的有效成分和药理作用  18-19
  第三节药用石斛的种质保存和开发应用前景  19-23
    1 药用石斛的种质保存  20-21
    2 药用石斛研究展望  21-23
第二章金钗石斛和铁皮石斛的离体快繁  23-45
  第一节研究概述  23-28
    1 种子的试管萌发  23-24
    2 由外植体获得再生植株  24
    3 类原球茎体及丛生芽的诱导和增殖  24-25
    4 试管苗的壮苗方法  25
    5 铁皮石斛和金钗石斛  25-28
  第二节铁皮石斛的组织培养  28-34
    1 材料与方法  28-29
    2 结果与分析  29-34
  第三节金钗石斛的离体快繁  34-41
    1 材料与方法  34-36
    2 结果与分析  36-41
  第四节讨论  41-45
    1 铁皮石斛的离体快繁  41-43
    2 金钗石斛的离体快繁  43-44
    3 小结  44-45
第三章 ABA对铁皮石斛类原球茎体体脱水耐性的诱导  45-101
  第一节 ABA与植物脱水耐性  45-53
    1 植物脱水耐性的基础  45-49
    2 与脱水耐性相关的主要基因  49-50
    3 ABA在植物脱水耐性诱导中的作用  50-53
  第二节铁皮石斛类原球茎体体脱水耐性的诱导  53-63
    1 引言  53
    2 实验材料  53
    3 实验方法  53-56
    4 结果与分析  56-61
    5 讨论  61-63
  第三节 ABA诱导脱水耐性后相关细胞结构的变化  63-76
    1 引言  63
    2 实验材料  63
    3 实验方法  63-65
    4 结果及分析  65-67
    5 讨论  67-70
    版图Ⅰ～Ⅴ  70-76
  第四节与ABA诱导脱水耐性相关cDNA差异片段的筛选  76-100
    1 引言  76
    2 实验材料  76-77
    3 实验方法  77-86
    4 结果及分析  86-98
    5 讨论  98-100
  第五节结论  100-101
致谢  101-102
参考文献  102-116

石斛类原球茎体增殖及ABA对其耐脱水性的诱导

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