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成年豚鼠膀胱ICC上超极化激活环核苷酸门控通道（HCN）电生理的初步研究

作　者: 鄢俊安
导　师: 宋波
学　校: 第三军医大学
专　业: 外科学
关键词: 膀胱 ICC 急性分离 HCN Ih电流
分类号: R694
类　型: 博士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

众所周知,膀胱肌组织能够产生不受神经系统控制的自发性动作电位,但目前其机制尚未明了。前期的研究中已经证实了膀胱存在ICC,简单记录了Ih电流。这些结果都不能证实ICC在膀胱中到底起到何种作用。Ih电流（在心脏称为If电流）在胃肠道和心脏窦房结的研究中被认为是“起搏电流”,而HCN通道是Ih电流的分子基础。我们前期的系列研究中已经提示ICC上可能存在HCN通道,但是其电生理特征还尚未明确。同时,既往的实验方法中采用培养的ICC进行电生理实验,效果并不理想,其主要原因是培养后的ICC进行膜片钳实验时难度很大,而且其所测参数并不一定代表了真实生理状态下的情况。因此本实验的目的:建立一套稳定、可靠的急性分离方法以获得活性更好的ICC;观察ICC上HCN通道的表达,完善HCN通道基本的电生理参数,为进一步的研究提供实验基础和理论依据。主要实验结果与结论如下:1.建立了稳定可靠的急性分离方法,所得到的细胞经免疫组织化学实验方法确认是ICC;其酶消化方案为:Ⅱ型胶原蛋白酶2.0mg/ml,胰酶抑制剂2.0mg/ml,木瓜蛋白酶1.0mg/ml,BSA1.0mg/ml,其消化时间15min。2.采用c-Kit和HCN抗原的免疫荧光双标法,证明了c-Kit阳性的ICC细胞上具有HCN通道抗原的阳性表达。3.ICC上记录到了Ih电流,其激活电压位于-140mV～－90mV之间,电流幅度为300-800pA,具有电压依赖性,并能被ZD7288（20μM）和Cs～＋（500μM）阻断。4.Ih电流反转电位42±2mV,PNa/P_K为0.42,膜电容为10-40pF;胞外ZD7288阻断Ih电流具有浓度依赖性,其IC50为24.7±6.5μmol/L,且其阻断效应不可逆;胞外Cs⁺阻断Ih电流具有浓度依赖性,其IC50为232.5±24.8μmol/L,且其阻断效应可逆。5.胞外钠钾对HCN通道皆有影响,具有浓度依赖性,其浓度的改变会影响HCN通道的激活和电导;胞外给予TTX、TEA及Ba²⁺对Ih电流无明显影响。6.胞外钙可明显影响HCN通道的激活时间,具有浓度依赖性;胞内cAMP可影响HCN通道的激活时间,具有浓度依赖性。

全文目录

英文名词缩写一览表  6-8
英文摘要  8-10
中文摘要  10-12
论文正文成年豚鼠膀胱 ICC上超极化激活环核苷酸门控通道(HCN)电生理的初步研究  12-83
  前言  12-14
  第一部分成年豚鼠膀胱ICC的急性分离和鉴定  14-26
    实验一成年豚鼠膀胱ICC的急性分离  14-18
      材料与方法  14-17
      结果  17-18
    实验二成年豚鼠膀胱ICC的鉴定  18-22
      材料  18-21
      方法  21-22
      结果  22
    讨论  22-25
    结论  25-26
  第二部分成年豚鼠膀胱ICC上超极化激活环核苷酸门控通道(HCN)的鉴定  26-45
    实验一成年豚鼠膀胱ICC上超极化激活环核苷酸门控通道(HCN)的组织蛋白学鉴定  26-30
      材料与方法  26-30
      结果  30
    实验二成年豚鼠膀胱ICC上超极化激活环核苷酸门控通道(HCN)的电生理学鉴定  30-40
      材料与方法  30-36
      结果  36-40
    讨论  40-44
    结论  44-45
  第三部分成年豚鼠膀胱ICC上超极化激活环核苷酸门控通道(HCN)的电生理特性初探  45-68
    材料与方法  45-52
    结果  52-62
    讨论  62-67
    结论  67-68
  全文结论  68-69
  致谢  69-71
  照片  71-76
  参考文献  76-83
文献综述一膀胱ICC样细胞研究进展  83-92
  参考文献  87-92
文献综述二超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN)研究进展  92-105
  参考文献  97-105
攻读博士学位期间发表论文情况  105-106
英文论著一  106-110
英文论著二  110-114
英文论著三  114-120
英文论著四  120-126

成年豚鼠膀胱ICC上超极化激活环核苷酸门控通道（HCN）电生理的初步研究

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