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低温下血压升高对血管平滑肌细胞BKca离子通道的影响

作　者: 刘燕锋
导　师: 葛郁芝
学　校: 南昌大学
专　业: 内科学
关键词: 冷应激性高血压 膜片钳 平滑肌细胞 钙激活钾通道(BKca)
分类号: R544.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：观察冷应激条件对大鼠血压的影响,并探讨低温条件下血管平滑肌细胞(VSMC)大电导钙激活钾通道电流(BKCa)的改变,为低温条件下血压升高防治提供理论依据。方法：①动物分组及冷应激高血压模型的建立：选用健康成年SD大鼠30只,体重150-180克,完全随机分为对照组和实验组,实验组又分为2、4、6、8周组,每组6只。对照组大鼠在室温下(25±1℃)饲养；实验组大鼠每天置于(4±1)℃、相对湿度为70%的气候箱中4小时,2、4、6、8周组大鼠接受寒冷刺激时间分别为持续2、4、6、8周；②血压测量：于实验前两周开始测量血压,每周2次,每次测量均在在大鼠安静状态下读数3次,取其平均值；③大鼠主动脉VSMC的分离及BKCa电流记录：腹腔麻醉后将SD大鼠处死,取出胸主动脉,游离出血.管中膜,剪成长2-4mmm、宽2mm的条块,分别放入酶液Ⅰ和酶液Ⅱ中,用急性酶分离法获得单个主动脉平滑肌细胞。采用标准的全细胞膜片钳技术(电压钳)在室温下(20-25℃)进行膜片钳电流记录,以电阻为4.0-7.0兆欧姆(MΩ)的玻璃微电极封接细胞,形成吉欧高阻封接水平后以适当程度的负压破膜,补偿串联电阻和细胞膜电容(Cm),形成全细胞记录模式,记录大鼠主动脉平滑肌细胞膜BKca电流。结果：1.大鼠收缩压变化：在冷应激环境中大鼠血压升高。实验组大鼠血压从第2周开始升高,2周冷应激大鼠模型血压为(102.8±2.25)mmHg,对照组大鼠血压为(89.16±3.73)mmHg,两组相比有显著统计学差异(p<0.05)；第4、6、8周冷应激大鼠模型血压分别为(114.53±4.21)mmllg:(121.94±3.03)mmHg: (135.27±5.37)mmHg,与对照组相比有显著统计学差异(p<0.01)。2.血管平滑肌细胞膜BKCa电流的变化：全细胞膜片钳技术记录到实验组大鼠主动脉平滑肌细胞膜BKca电流、电流密度随冷应激时间延长而增大。2周冷应激大鼠模型主动脉平滑肌细胞膜BKca电流密度平均为(138.47±6.57)pA/pF,对照组大鼠主动脉平滑肌细胞膜RKca电流密度为(79.79±4.80)pA/pF,两组相比有统计学差异(P<0.()1,n=6)。4、6、8周大鼠主动脉平滑肌细胞膜BKca(?)电流密度分别为(211.29±8.11)pA/pF:(295.27±10.77)pA/pF (355.23±4.55)pA/pF,与对照组相比有统计学差异(P<0.01,n=6)。与对照组大鼠比较,第2、4、6、8周组大鼠电流分别增加(73.99±12.96)%、(165.91±23.35)%、(271.34±28.49)%、(346.35±23.55)%。3.大鼠主动脉血管平滑肌细胞膜BKca电流密度增大与冷应激刺激时间及血压有显著性相关性(r=0.976,p<0.01)。结论：1.冷应激环境的刺激可致大鼠血压升高。2.大鼠主动脉血管平滑肌细胞膜BKca电流密度增大与冷应激刺激时间及血压有显著相关。3.寒冷致大鼠主动脉平滑肌细胞膜BKca电流密度的增大进而提示平滑肌细胞钙离子浓度增高是产生大鼠血压升高的可能病理基础。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
英文缩写与中英文对照  9-10
第1章 引言  10-12
第2章 材料与方法  12-22
  2.1 实验材料  12
    2.1.1 实验动物  12
    2.1.2 主要药物及试剂  12
  2.2 实验溶液配制  12-14
    2.2.1 溶液Ⅰ  12-13
    2.2.2 溶液Ⅱ  13
    2.2.3 全细胞电极内液  13
    2.2.4 灌流液(细胞外液)  13
    2.2.5 酶液Ⅰ配制  13-14
    2.2.6 酶液Ⅱ配制  14
  2.3 微电极制备  14
  2.4 实验仪器  14-15
    2.4.1 建立冷应激高血压大鼠模型所需实验仪器  14
    2.4.2 细胞分离所需实验仪器  14-15
    2.4.3 细胞电生理实验所需实验器材  15
  2.5 实验方法  15-21
    2.5.1 冷应激高血压大鼠模型的建立  15-16
    2.5.2 冷应激高血压大鼠模型的血压测定  16
    2.5.3 大鼠主动脉VSMC的分离  16-17
    2.5.4 膜片钳全细胞记录  17-21
  2.6 统计学分析  21-22
第3章 结果  22-28
  3.1 大鼠血压的动态变化  22-23
  3.2 大鼠平滑肌细胞膜BKCa电流的变化  23-25
  3.3 大鼠主动脉平滑肌细胞膜BKCa电流密度-电压(Ⅰ-Ⅴ)曲线测定  25-26
  3.4 冷应激时间对大鼠主动脉平滑肌细胞膜BKCa电流的影响  26-28
第4章 讨论  28-31
  4.1 冷应激大鼠高血压模型的建立  28
  4.2 急性分离大鼠主动脉平滑肌细胞  28-29
  4.3 动脉平滑肌细胞膜上BKCa的分子结构、电生理特性及其对血管紧张性的调控  29-30
  4.4 实验局限之处和还需解决的问题  30-31
第5章 结论  31-32
致谢  32-33
参考文献  33-35
攻读学位期间研究成果  35-36
综述  36-44
  参考文献  43-44

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 血压异常 > 高血压
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