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氨丁苯酞的代谢转化及其立体选择性研究

作　者: 常雁
导　师: 王慕邹；再帕尔·阿不力孜
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 药物分析
关键词: 代谢物代谢产物立体选择性代谢转化代谢研究预处理方法体外代谢生物样品对映体胆汁
分类号: R96
类　型: 博士论文
年　份: 2000年
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内容摘要

本文对氨丁苯酞（ABP）的代谢转化进行了系统研究。首先从体外代谢研究入手，鉴定了大鼠肝微粒体温孵体系中的代谢物。结果表明氨丁苯酞体外代谢转化以氨基酰化反应为主。在此基础上进一步对体内代谢进行研究，采用梯度洗脱HPLC法分析大鼠胆汁、尿和血浆中氨丁苯酞及其代谢物。从胆汁样品中直接分离制备了4个代谢物。我们还采用GC-MS、LC-MS及LC-MS／MS技术对氨丁苯酞及其代谢产物进行了研究，检测到了一些微量代谢物。通过上述研究，共发现氨丁苯酞体外及体内13种代谢产物，基本阐明了它的代谢途径。在对氨丁苯酞消旋体代谢研究的基础上，还考察了两个对映体的代谢差异，讨论了代谢的立体选择性。本文研究的具体内容包括以下几个方面：1．氨丁苯酞在大鼠肝徽粒体中的代谢转化研究采用大鼠肝微粒体温孵体系对氨丁苯酞进行体外代谢，通过HPLC-DAD方法对代谢样品进行分析，检测到4个代谢物。结果表明氨丁苯酞在该体系中代谢转化率很低。采用GC-MS方法对代谢样品进行分析，检测到3个代谢物（M1，M2，M3），通过与合成的代谢物标准品进行对照，进一步确定了代谢物M1和M2的结构。体外代谢研究表明氨丁苯酞的体外代谢转化以氨基酰化反应为主。2．氨丁苯酞体内代谢研究采用梯度洗脱HPLC法对胆汁、尿样和血浆中氨丁苯酞及其代谢物进行研究。直接从大鼠胆汁样品中分离制备了4个代谢物（M4，M5，M6，M7），并通过MS、MS／MS和¹HNMR谱进行了鉴定。另外，还分析检测到一些微量代谢物。体内代谢研究结果表明，氨丁苯酞在体内广泛代谢，其代谢转化以氨基乙酰化反应为主，同时伴随羟化反应的发生。3．氨丁苯酞代谢的立体选择性在上述研究基础上，考察了氨丁苯酞两个对映体的代谢差异。体外代谢研究表明，采用大鼠肝微粒体温孵氨丁苯酞的对映体未产生显著差异。对大鼠分别给药（+）-ABP和（-）-ABP后收集的胆汁样品进行分析比较后发现，（+）-ABP产生的代谢物M1、M6和M7的量大于（-）-ABP产生的相应代谢物，表现出较明显的立体选择性，立体选择性方向为（+）>（-）。尿样的分析结果表明（+）-ABP主要以代谢物形式经尿排泄，而（-）-ABP主要以原药形式经尿排泄。（+）-ABP在血浆中的代谢物以M1的相对含量最高，而（-）-ABP的代谢物中以M4的相对含量最高。另外，ABP的两个对映体与消旋体的代谢亦存在一定差异。4．GC-MS法分析检测氨丁苯酞及其代谢产物建立了GC-MS技术分析检测氨丁苯酞及其代谢产物的方法。该法共检测到体外和体内11种代谢物。通过EI-MS谱的解析，找到了原药及其代谢物的质谱裂解规律，从而推断出代谢物的结构。其中代谢物M3的羟基化位置由质谱尚未能确定。5．LC-MS和LC-MS／MS法分析检测氨丁苯酞及其代谢产物考察了利用LC-MS和LC-MS／MS技术直接分析检测生物样品中氨丁苯酞及其代谢产物的方法。利用这些技术共检测到大鼠体内8个代谢物，发现了利用其他方法未检测到的C₃位羟基化的代谢产物M13。

全文目录

摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
一、前言  10-23
  (一) 研究氨丁苯酞代谢转化及其立体选择性的目的和意义  10-11
  (二) 研究药物代谢转化的系统  11-14
  (三) 药物代谢反应的立体选择性  14-17
  (四) 研究药物代谢转化的分析方法  17-21
  (五) 目标与策略  21-23
二、实验材料  23-26
  (一) 药品与试剂  23
  (二) 仪器  23-25
  (三) 动物  25-26
三、氨丁苯酞在大鼠肝微粒体中的体外代谢转化研究  26-35
  (一) 动物的诱导与肝微粒体的制备  26
    1.动物的诱导  26
    2.大鼠肝微粒体的制备  26
  (二) 氨丁苯酞在大鼠肝微粒体中的温孵与代谢产物的检测  26-32
    1.温孵条件的选择  26-27
    2.样品制备与反相HPLC分析  27-31
    3.GC-MS分析  31
    4.讨论  31-32
  (三) 体外代谢样品预处理方法的拟定与考察  32-35
    1.预处理方法的拟定  32
    2.回收率的测定  32-35
四、氨丁苯酞体内代谢研究  35-55
  (一) 药物的准备及生物样品的收集  35-36
    1.药物混悬液的制备  35
    2.大鼠胆汁的收集  35
    3.大鼠尿液的收集  35-36
    4.大鼠血样的收集  36
  (二) 生物样品预处理方法的拟定  36-37
    1.胆汁的预处理方法  36
    2.尿样的预处理方法  36-37
    3.血浆样品的预处理方法  37
  (三) 生物样品预处理方法的考察—回收率的测定  37-39
    1.胆汁中ABP的回收率  38
    2.尿样中ABP的回收率  38-39
    3.血浆样品中ABP的回收率  39
  (四) 氨丁苯酞体内代谢产物的分析  39-55
    1.胆汁中氨丁苯酞及其代谢产物的分析  39-45
    2.尿样中氨丁苯酞及其代谢产物的HPLC分析  45-48
    3.血浆中氨丁苯酞及其代谢产物的HPLC分析  48
    4.讨论  48-55
五、氨丁苯酞代谢的立体选择性  55-71
  (一) (+)、(-)-氨丁苯酞在大鼠肝微粒体中的代谢差异  55-58
  (二) (+)、(-)-氨丁苯酞在大鼠体内的代谢差异  58-71
    1.大鼠胆汁中(+)、(-)-氨丁苯酞及其代谢产物的分析比较  58-62
    2.大鼠尿样中(+)、(-)-氨丁苯酞及其代谢产物的分析比较  62-66
    3.大鼠血浆中(+)、(-)-氨丁苯酞及其代谢产物的分析比较  66-70
    4.小结  70-71
六、氨丁苯酞及其代谢产物的GC-MS分析  71-97
  (一) 仪器  71
  (二) 操作条件  71
  (三) 分析样品的制备  71-72
  (四) 分析结果  72-97
    1.大鼠肝微粒体温孵体系中氨丁苯酞及其代谢产物的GC-MS分析  72-73
    2.生物样品中氨丁苯酞及其代谢产物的GC-MS分析  73-78
      (1) 大鼠胆汁中氨丁苯酞及其代谢产物的GC-MS分析  73-76
      (2) 大鼠尿样中氨丁苯酞及其代谢产物的GC-MS分析  76-77
      (3) 大鼠血浆中氨丁苯酞及其代谢产物的GC-MS分析  77-78
    3.小结  78-97
七、氨丁苯酞及其代谢产物的LC-MS／MS分析  97-120
  (一) 仪器  97
  (二) 操作条件  97
  (三) 样品的制备  97
  (四) 分析结果  97-120
    1.大鼠胆汁中氨丁苯酞及其代谢产物的LC-MS／MS分析(Ⅰ)  97-108
    2.尿样中氨丁苯酞及其代谢产物的LC-MS分析  108
    3.血浆样品中氨丁苯酞及其代谢产物的LC-MS分析  108-113
    4.大鼠胆汁中氨丁苯酞及其代谢产物的LC-MS／MS分析(Ⅱ)  113-119
    5.讨论  119-120
八、结语  120-122
参考文献  122-126
发表文章  126-127
致谢  127-128
附录：氨丁苯酞及其代谢产物的~1HNMR和MS谱图  128-138

氨丁苯酞的代谢转化及其立体选择性研究

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