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葡萄籽原花青素提取物预防龋病的实验研究

作　者: 毕玲
导　师: 傅柏平
学　校: 浙江大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 葡萄籽原花青素提取物(GSPE) 变形链球菌龋病透射电镜
分类号: R780.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 227次
引　用: 3次
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内容摘要

目的:研究葡萄籽原花青素提取物（GSPE）对变形链球菌生长、产酸及防龋作用,探讨防龋机制。方法:实验一:选用国际标准菌株,变形链球菌族（以下简称变链菌）的变形链球菌（S.mutans Ingbritt,血清型c）和远缘链球菌（S.Sobrinus 6715,血清型g）,在含1%蔗糖的胰蛋白酶消化大豆液体培养基（TSB）中厌氧培养（CO₂80%,N₂10%,H₂10%）,采用液体/琼脂稀释法体外抑菌试验分别测定葡萄籽原花青素提取物（GSPE）和茶多酚（TP）对两种变链菌的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。通过测定MIC值以下4个浓度梯度培养前后PH值的变化,并以不加药的培养液为对照,进一步观察GSPE对变形链球菌产酸能力的影响。变链菌在浓度为1/2 MIC的GSPE的TSB中培养24 h,离心得菌体,以生理盐水洗3次,离心,用2%（v/v）pH 7.4的戊二醛固定液固定,4℃保存,10 mg/ml四氧化锇后固定,室温保存1 d,醋酸铀染色后经一系列不同浓度的酒精逐级脱水,环氧树脂包埋,超薄切片,枸椽酸铅染色,透射电镜下观察GSPE作用后S.mutans Ingbritt和S.Sobrinus 6715的形态学变化。实验二:选择21 d鼠龄断乳Sprague-Dawby（SD）大鼠24只,随机分成3组,每组8只,雌雄各半,分别为葡萄籽原花青素提取物（GSPE）溶液、茶多酚（TP）溶液、蒸馏水（H₂O）组。21～23 d鼠龄期间给予古有广谱抗生素（2 kg饲料加氨苄青霉素、氯霉素各1g）的致龋饲料2000#,其它时间的饲料中不加抗生素。在鼠龄24～28 d期间,连续5 d于口腔内接种变形链球菌S.Sobrinus 6715(10^5～6CFU/ml),每次接种100 ul。自29 d起各组分别用MIC浓度的GSPE溶液4 mg/ml、TP溶液2 mg/ml、蒸馏水处理。大鼠取仰卧位,将0.3 ml药物用钝针头注射器注于大鼠牙面及口腔,维持15 s,每天处理1次,处理后30 min内禁饮食。连续处理60 d后处死大鼠,采用Keyes龋齿评分法观察、评估大鼠磨牙牙合面窝沟患龋情况,采用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析和均数两两比较,总结GSPE对Sprague-Dawley大鼠磨牙牙合面窝沟龋的预防效果。结果:实验一:①GSPE对S.mutans Ingbritt和S.Sobrinus 6715的MIC均为4.00mg/ml,MBC均为8.00 mg/ml;TP对S.mutans Ingbritt和S.Sobrinus 6715的MIC均为2.00 mg/ml,MBC均为4.00 mg/ml。②产酸抑制实验中MIC值以下4个浓度的前三个浓度（2.00 mg/ml,1.00 mg/ml,0.50 mg/m1）与对照组比较对变形链球菌产酸有明显的抑制作用（P＜0.05）,第四个浓度（0.25 mg/ml）无明显抑制作用（P＞0.05）。③透射电镜观察发现GSPE主要引起S.mutans Ingbritt细胞水肿、细胞壁破坏,S.Sobrinus 6715细胞质空泡性变。实验二:动物实验发现GSPE和TP均能抑制大鼠龋病的发生发展（P＜0.05）,而GSPE组与TP组相差不显著（P＞0.05）;Dx级龋损仅见于蒸馏水组,葡萄籽原花青素提取物（GSPE）组及茶多酚（TP）组均未发生Dx级龋损。结论:本研究表明,GSPE能抑制变形链球菌和远缘链球菌的生长、产酸,对变链菌的主要影响是菌体的细胞水肿、细胞壁破坏,细胞质空泡性变,GSPE能减少实验SD大鼠龋病的发生,减轻龋蚀程度,可以考虑用于龋病预防。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-8
前言  8-10
研究方法  10-15
结果  15-20
讨论  20-23
全文总结  23-24
参考文献  24-28
综述  28-37
论文  37-46
致谢  46

葡萄籽原花青素提取物预防龋病的实验研究

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