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脐带血单个核细胞迁移体外实验研究

作　者: 赵劭懂
导　师: 马艳萍
学　校: 山西医科大学
专　业: 血液内科
关键词: 脐血 细胞迁移 基质细胞衍生因子-1(SDF-1) 亚族受体-4(CXCR4)
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


目的:异基因造血干细胞（HSC）移植是根治恶性血液病的唯一方法。对于缺乏HLA匹配供者的病人,寻找可靠的HSC源非常必要。除骨髓外,胎儿组织如胎儿肝脏、脐带或胎盘血以及成人动员的外周血中都含有HSC,但由于不同来源的HSC具有各自的特殊性,使临床应用受到局限。与成人血相比,脐血有其独特的优势:如含有较高比例的HSC;造血干/祖细胞中端粒较长;体外对细胞因子的刺激敏感;有较强的增殖能力;免疫细胞功能幼稚;容易获得;对供者无损害;病毒抗原污染机会少等。目前脐血被认为是最有前途的HSC来源。但由于一份脐血中所含的造血干/祖细胞的数量有限,脐血移植主要局限于小儿和体重轻的成人患者,极大地限制了脐血移植在临床的广泛应用。体外扩增脐血干/祖细胞以拓宽临床应用范围一直是研究的热点。但大量的临床实践表明,造血干细胞成功移植不仅取决于造血干/祖细胞的数量,而且与其归巢能力密切相关。基质细胞衍生因子—1（stromal cell-derived factor,SDF-1）及其受体（CXCR4）作为a趋化因子家族的一个成员,不但与调节机体免疫功能、维持胚胎发育、细胞增殖等有关,而且SDF-1/CXCR4在免疫细胞趋化、肿瘤转移以及造血细胞的动员和归巢等方面发挥着关键作用。为此,我们探讨了趋化因子SDF-1以及其受体CXCR4在细胞迁移中的作用,旨在为临床成功进行造血干细胞移植提供一定的理论依据。方法:1.采脐血后应用Ficoll淋巴细胞分离液分离、收集单个核细胞,洗涤两遍后备用。2.调整细胞浓度后将细胞接种于含有SCF、FL、TPO造血生长因子的24孔培养板,分别在培养第4、7和10天半定量换液,补充生长因子,观察细胞扩增情况。3.将1×105个细胞悬浮于含0.1ml平衡液的Transwell上腔,其下腔为含有不同浓度SDF-1的0.6ml趋化液,在37℃、5%CO2、100%湿度条件下趋化4～5小时,同时另设细胞抗原CXCR4阻断组。计数进入下腔的细胞。4.将1×106个细胞接种在含生长因子SCF、FL、TPO的2ml IMDM培养基中培养。分别在培养的第0、4、7、10、14天,收集细胞,流式细胞仪检测CXCR4表达情况。同时,在第3步骤中获得的SDF-1最佳趋化浓度条件下检测细胞迁移率。5.统计分析采用SPSS 13.0统计软件,所有检验结果采用双侧检验,P值小于或等于0.05认为差别有统计学意义。计量数据用均数±标准差（（?）±s）表示,组间比较采用单因素方差分析,两变量间关系研究采用直线相关分析。结果:通过对6例标本的观察,我们发现1.每份脐血的体积及所含有核细胞在不同个体中差异较大。6份脐血体积范围在44～91ml,平均69.17±17.43ml;有核细胞范围为（1.14～4.52）×108个,平均2.91±1.27×108个。2.经14天重组人造血生长因子组合SCF、FL、TPO体外培养,各阶段的MNC均得到有效扩增;至14天时,总有核细胞数扩增了248倍,细胞数量显著增加。3.脐血MNC迁移实验发现:随着SDF-1浓度增加,新鲜脐血MNC迁移率升高,但SDF-1浓度达到150ng/ml时迁移率趋于平稳;当CXCR4阻断型抗体作用后,MNC迁移率与未加SDF-1组无差异。4.重组人造血生长因子组合SCF、FL、TPO体外培养MNC时,培养的早期,趋化因子SDF-1受体CXCR4的表达升高,同时脐血MNC迁移率也升高。但随着培养时间的延长,CXCR4表达量渐渐降低,而且脐血MNC迁移率随之降低。结论:1.经有核细胞计数证明,在含血清、无基质细胞支持的条件下,采用重组人造血生长因子SCF、FL、TPO联合扩增系统,可以有效地对新鲜脐血MNC进行体外扩增。2.通过Transwell Plate可以有效地模拟细胞穿越内皮现象。随着趋化因子SDF-1浓度的增高,MNC迁移率递增,但当SDF-1浓度达一定高时,细胞趋化率达稳定,继续增高SDF-1浓度,细胞迁移率变化不显著。3.MNC迁移率与趋化因子受体CXCR4表达量间存在相关性,应用CXCR4阻断抗体后MNC趋化率与未加SDF-1无显著差异。

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
正文  9-28
  前言  9-10
  材料及方法  10-13
  结果  13-15
  讨论  15-18
  结论  18-19
  参考文献  19-22
  附图  22-28
综述  28-34
  正文  28-32
  参考文献  32-34
作者简历  34-35
致谢  35

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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