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芒果甙通过激活Nrf2-ARE抗氧化反应通路抑制VP-16诱导的人脐血细胞DNA损伤作用的研究

作　者: 李姗姗
导　师: 陈燕
学　校: 华中科技大学
专　业: 血液内科
关键词: 芒果甙 Nrf2 ARE NQO1 DNA损伤人脐血细胞
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 22次
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内容摘要

目的:本实验以正常人脐血单个核细胞为实验对象,体外研究芒果甙(MA)对化学诱变剂VP-16诱导的脐血细胞DNA损伤是否具有预防保护性作用,及其与Nrf2/ARE抗氧化通路在抗致癌物对DNA损伤作用之间的联系,并进一步探讨芒果甙预防白血病的可能分子机制。方法:体外分离正常人的脐血单个核细胞,DNA损伤模型由VP-16诱导,芒果甙提前干预脐血细胞,即分为VP-16与MA+VP-16两组。分别用单细胞凝胶电泳SCGE实验即慧星实验(comet assay)、微核实验(MNT)检测DNA损伤;间接免疫荧光技术(共聚焦镜)和免疫印迹(Western Blotting)检测Nrf2的定位,以及芒果甙对Nrf2和NQO1蛋白表达的作用;凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测核内Nrf2与顺式作用元件ARE的结合。结果:化学诱变剂VP-16对人脐血细胞具有明显的DNA损伤作用,10μg/μl,2h时就可呈现全细胞DNA的损伤,其损伤程度呈时间与浓度依赖性;芒果甙干预组与未加芒果甙组相比较,芒果甙组(提前干预4h)DNA损伤程度均比未加芒果甙组低;在脐血细胞内无论是在对照组还是在MA干预组,Nrf2均主要定位于细胞核内。芒果甙诱导Nrf2的表达呈现时间与浓度依赖性,核内Nrf2与核内顺式作用元件ARE特异性的结合,诱导ARE下游解毒酶基因NQO1的表达,也具有其时间依赖性,从而发挥其抗氧化解毒的活性。结论:在本实验中,证实芒果甙可抑制和保护化学诱变剂VP-16所诱导的脐血细胞DNA损伤,而这种保护机制可能是通过激活Nrf2/ARE抗氧化通路来完成的。因此芒果甙提前干预保护细胞免受DNA损伤的活性可能使其成为一种新的预防肿瘤的药物,尤其是为预防治疗相关性白血病提供一种可能,值得进一步研究。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-8
前言  8-10
材料和方法  10-29
结果  29-37
讨论  37-39
参考文献  39-44
综述  44-54
  参考文献  49-54
致谢  54

芒果甙通过激活Nrf2-ARE抗氧化反应通路抑制VP-16诱导的人脐血细胞DNA损伤作用的研究

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