学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

乳房链球菌GapC蛋白的表达及免疫保护研究

作　者: 夏春雷
导　师: 杨玉英
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 乳房链球菌 GapC蛋白 GAPDH 免疫保护性
分类号: Q786
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 83次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载

内容摘要

链球菌(Streptococci)是引起人和动物多种疾病的重要致病菌。由于不同种链球菌菌株间缺乏共同的保护性抗原,目前研究的Streptococci疫苗在临床试验中应用效果并不理想。研究表明甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)蛋白可作为抗寄生虫和微生物感染的疫苗抗原。因而,本研究利用Streptococci表面具有GAPDH活性的保守性GapC蛋白制备免疫原,探讨其免疫原性,及其对Streptococci感染的免疫保护作用。本研究首先通过PCR方法扩增临床S.uberis菌株的gapC基因,随后将其克隆到pGEM-T载体上。重组克隆pGEM-T-gapC酶切后,将gapC基因插入到pET-28a(+)载体上,构建重组质粒pET-28a(+)-gapC。测序后与GenBank上发表的序列进行对比分析。重组表达质粒转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导后,通过SDS-PAGE鉴定GapC融合蛋白的表达。重组蛋白经纯化后进行Western blot检测,确定其特异性抗体结合活性。将80只健康小鼠随机分成4组,用重组蛋白及对照剂(PBS)对其进行免疫。应用ELISA方法检测血清IgG抗体水平。最后,用无乳链球菌(S.agalactiae)和停乳链球菌(S.dysgalactiae)对免疫小鼠攻毒,观察攻毒后小鼠的临床症状、病理变化,对小鼠的肝、脾及肾脏进行细菌分离鉴定,确定其发病情况,进而评价GapC蛋白的免疫保护效果。结果,本研究成功扩增并克隆S.uberis的gapC基因,该菌株的gapC基因与GenBank上S. uberis gapC基因序列AF421900的同源性为99.8%,氨基酸同源性为100%;且与GenBank发表的S.agalactiae gapC基因序列AF421899的同源性为91.4%,与S.dysgalactiae gapC基因序列AF375662的同源性为88.9%。SDS-PAGE结果表明,重组质粒pET-28a(+)-gapC在E.coli BL21(DE3)中成功表达,Western Blot检测结果表明重组蛋白具有良好的抗原性。GapC蛋白免疫组血清中IgG抗体水平在三免后第14天达到最高(1:64000)。三免第10天,用5×10~8CFU/200μL的S.agalactiae和2.5×10~8CFU/200μL的S.dysgalactiae对试验小鼠攻毒,保护率分别达到100%和95%。本研究获得的S.uberis GapC重组蛋白对S.agalactiae和S.dysgalactiae的攻击提供非常好的免疫保护作用,可以作为疫苗抗原应用于临床防制链球菌感染,为链球菌基因工程疫苗的研制奠定了基础。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-7
第一章文献综述  7-19
  1.1 引言  7
  1.2 链球菌的生物学特性  7-9
  1.3 链球菌GapC蛋白的生物学特性  9-11
  1.4 GAPDH的新功能  11-14
  1.5 链球菌感染的机制  14-16
  1.6 链球菌病的药物治疗  16
  1.7 链球菌病的免疫预防  16-18
  1.8 本研究的目的和意义  18-19
第二章 gapC 基因在大肠杆菌中的克隆、表达  19-32
  2.1 材料  19
  2.2 方法  19-25
  2.3 结果  25-29
  2.4 讨论  29-32
第三章重组 GapC 蛋白免疫小鼠的保护试验  32-38
  3.1 材料  32
  3.2 方法  32-34
  3.3 结果  34-37
  3.4 讨论  37-38
第四章结论  38-39
参考文献  39-44
致谢  44-45
附录  45-48
  附录 1:测序结果  45-47
  附录 2:波形图  47-48
个人简历  48

乳房链球菌GapC蛋白的表达及免疫保护研究

内容摘要

全文目录

相似论文