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直接免疫荧光检测GPMV-Ⅰ方法的建立及其应用于GPMV-Ⅰ感染雏鹅后病毒在各器官分布规律的研究

作　者: 王洪亮
导　师: 曾德年
学　校: 湖南农业大学
专　业: 预防兽医
关键词: 鹅副粘病毒血清Ⅰ型 直接免疫荧光 抗原定位
分类号: S858.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


以甲醛灭活的GPMV-Ⅰ尿囊液为抗原，免疫健康白鹅制备鹅抗GPMV-Ⅰ的IgG，再用FITC对提纯的IgG进行标记，成功建立了检测GPMV-Ⅰ抗原的直接免疫荧光组织化学法。经交叉试验，吸收试验，替代试验和阳性、阴性对照表明：该方法具有操作简单，特异性好，敏感性高的优点。该方法的最佳条件为：以多聚赖氨酸为粘片剂，冰冻切片，在4℃下用丙酮固定处理30min，进行直接法染色。标记抗体稀释度为1：16，胰蛋白酶修复抗原20min，荧光标记抗体反应时间为37℃30min，90％缓冲甘油封片，可获得比较满意的反应效果。该方法具有特异、直观、和敏感的特点，可用于GPMV-Ⅰ感染的实验室诊断、抗原定位以及甲醛固定标本的回顾性诊断。该方法只与GPMV-Ⅰ感染雏鹅组织呈阳性反应，与小鹅瘟病毒，鹅大肠杆菌，沙门氏菌，巴氏杆菌人工感染并致死雏鹅的肝组织呈阴性反应。运用此方法，对人工感染GPMV-Ⅰ后病毒在雏鹅体内的分布规律进行了研究，从病毒的时间分布情况看：GPMV-Ⅰ感染后8h能从肝脏、肾脏中检出病毒抗原；感染后12h，能够从雏鹅的肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、十二指肠、胰腺和胸腺中检出病毒抗原：感染后24h，能从雏鹅的肝脏、肺脏、腺胃、法氏囊等9种组织中检出病毒抗原；感染后96h仅不能从肌肉、心脏和大脑中检测出抗原；感染后192h，食道和直肠中己检测不出GPMV-Ⅰ抗原，其他组织的阳性程度降低；在感染后288h只能从肝脏和肾脏中检出病毒原。从感染后病毒各个组织的分布情况看，感染后从各组织中的检出病毒情况为：肝脏(17／22)＞肾脏(16／22)＞气管(14／22)，肺(14／22)＞十二指肠(13／22)＞法氏囊(12／22)，胰腺(12／22)＞胸腺(11／22)，脾脏(11／22)＞腺胃(10／22)＞食道(6／22)＞直肠(5／22)。运用建立的DIF方法对人工感染GPMV-1后病毒在雏鹅体内的分布规律进行研究表明：GPMV-Ⅰ感染雏鹅后4h及20d后均不能从体内检出病毒抗原。GPMV-Ⅰ感染雏鹅后96h病毒在机体内各组织的分布最为广泛，但在检测的组织中肝脏的检出率最高，实验组始终未能从肌肉、心脏、大脑中检出病毒抗原。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
第一章 前言  9-16
  1.鹅副粘病毒病研究进展  9-13
  2 免疫组织化学研究进展  13-14
  3 本研究的背景、目的和意义  14-16
第二章 GPMV-Ⅰ人工感染雏鹅试验  16-21
  1 材料与方法  16-18
  2 结果与分析  18-19
  3 讨论  19-21
第三章 鹅抗GPMV-Ⅰ高免血清的制备及其IgG的纯化及FITC标记  21-31
  1 材料与方法  21-26
  2 结果与分析  26-28
  3 讨论  28-31
第四章 直接免疫荧光检测GPMV-Ⅰ方法的建立与优化及GPMV-Ⅰ在雏鹅体内分布规律的研究  31-42
  1 材料与方法  31-33
  2 试验结果与分析  33-37
  3 讨论  37-42
结论  42-43
参考文献  43-48
附录A:缩略语对照表  48-49
附录B:大体病变图片  49-50
附录C:组织病理学图片  50-52
附录D:直接免疫荧光图片  52-55
致谢  55-56
作者简历  56

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家禽 > 鹅
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