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青海蚕豆、豌豆病毒病调查和菜豆黄花叶病毒（BYMV）全系列分析

作　者: 王信
导　师: 杨家荣；王晓鸣
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 植物病理学
关键词: 菜豆黄花叶病毒蚕豆和豌豆分离物外壳蛋白全序列抗性鉴定
分类号: S436.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 76次
引　用: 2次
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内容摘要

青海省是我国蚕豆和豌豆主要产地。病毒病是该地蚕豆和豌豆上的重要病害。2005年和2006年,中国和澳大利亚两国科研人员在青海的7个市县进行了蚕豆和豌豆病毒病田间调查,同时对所采样本进行了组织印迹免疫法(Tissue blot immunoassay, TBIA)检测,共检测到3种病毒,其中菜豆黄花叶病毒(Bean yellow mosaic virus, BYMV)是最主要的病原。本研究以BYMV的7个中国青海蚕豆分离物和1个豌豆分离物侵染的叶片总RNA为模板,利用BYMV登录的序列设计了一对特异性引物, RT-PCR扩增获得了长度为1071bp的目标片段。对目的片段进行了纯化回收、连接、转化、筛选并测序。序列分析显示此片段中包含822bp的CP序列,编码273个氨基酸。8个分离物的CP基因核苷酸和推导编码蛋白质的氨基酸序列的同源性分别为99.0%~99.9%和99.3%~100.0%。与18个BYMV外壳蛋白进行序列同源性和系统进化树分析的结果表明,8个分离物的核苷酸和氨基酸的同源性分别为83.6%~99.9%和90.1 %~100%。BYMV中国青海蚕豆分离物与中国云南蚕豆分离物同源性最高;CP的序列特征揭示,在BYMV中病毒的蚜传相关基序为NAG。通过6次RT-PCR得到了BYMV青海分离物(9-16)基因组的全序列,这是国内关于此病毒基因组全序列的首次报道。序列分析结果表明:9-16全序列共9547个核苷酸,5′-和3′-非翻译区序列分别为205和174个核苷酸,中间为9168个核苷酸的开放读框,编码一个长为3056个氨基酸、分子量约为352.6 kD的多聚蛋白。此病毒基因组及其所编码的多聚蛋白的大小与其它马铃薯Y病毒属病毒较为相近。多聚蛋白含有9个可能的蛋白酶切位点,切割后产生的成熟蛋白产物中具有保守的氨基酸基序,这与其它potyviruses都非常相似。在10个蛋白产物中,3′- NTR、NIb和CP相对保守,而5′-NTR、P1和P3变异最大。将BYMV用摩擦接种的方法分别接种蚕豆和豌豆幼苗,鉴定了51个蚕豆品种和66份豌豆材料的抗性。只有1个蚕豆品种(H2508)和3个豌豆材料(G0861、G4774、G4835)属于抗病品种,有3个蚕豆品种(H2063、H2412、FE3)和12份豌豆材料属于中抗品种,其余都是感病和高感材料。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-6
第一章文献综述  6-18
  1.1 研究背景  6-13
  1.2 菜豆黄花叶病毒的研究现状  13-14
  1.3 植物病毒检测技术现状  14-17
  1.4 课题来源和选题依据  17-18
第二章材料与方法  18-28
  2.1 材料  18-19
  2.2 方法  19-28
第三章结果与分析  28-56
  3.1 青海蚕豆和豌豆病毒病调查与鉴定  28-29
  3.2 青海蚕豆和豌豆BYMV 分离物的CP 基因研究  29-36
  3.3 青海蚕豆BYMV 分离物的全序列特征  36-56
第四章蚕豆、豌豆抗BYMV 鉴定  56-59
  4.1 抗性鉴定结果  56-57
  4.2 不同类型或来源材料的抗性比较  57-58
  4.3 抗性水平与症状表现及发病率关系  58
  4.4 抗病表型与植株体内病毒含量的关系  58-59
第五章讨论  59-62
  5.1 RNA 的提取  59
  5.2 关于全序列引物的设计  59-60
  5.3 完整的3′-NTR、5′-NTR 的获得  60
  5.4 关于温室人工接种  60
  5.5 关于蚕豆和豌豆抗BYMV 的标准  60-61
  5.6 血清学检测  61-62
第六章结论  62-66
参考文献  66-71
致谢  71-72
作者简介  72

青海蚕豆、豌豆病毒病调查和菜豆黄花叶病毒（BYMV）全系列分析

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