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文昌鱼一种新卵黄蛋白原的纯化、鉴定及其免疫防御功能的研究

作　者: 孙亚宁
导　师: 张士璀
学　校: 中国海洋大学
专　业: 海洋生物
关键词: 文昌鱼卵黄蛋白原纯化鉴定免疫印记凝集蛋白抑菌活性
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

卵黄蛋白原（Vitellogenin，Vg）是所有卵生动物卵黄蛋白的前体，它是受激素调控的一种大分子的磷脂糖蛋白。Sun和Zhang（2001）首次报道了文昌鱼Vg的纯化鉴定，分离出一种天然状态下320kDa由同源二聚体亚基组成的文昌鱼Vg。但有关文昌鱼是否存在其它形式的Vg及Vg在机体免疫防御方面有何功能至今未见报道。本文应用Sephadex G-200葡聚糖凝胶过滤柱和DEAE-23纤维素弱阴离子交换柱两步层析从文昌鱼卵巢中分离出一种蛋白质。天然聚丙烯酰胺凝胶电泳显示其分子量为500kDa，而变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示它只有一条分子量为150 kDa的多肽。天然电泳后的凝胶分别利用苏丹黑B进行脂蛋白染色、高碘酸-希夫试剂进行糖蛋白染色、甲基绿进行磷蛋白染色，结果显示该蛋白是一种含糖、含脂和含磷的蛋白质。此外，该蛋白还能与小鼠抗文昌鱼Vg血清发生特异性的抗原抗体结合反应。因此，我们推断该蛋白可能是一种新的文昌鱼Vg。这种新的文昌鱼Vg可能由两个分子量为150kDa的同源二聚体加上脂肪构成。这是关于文昌鱼第二种Vg形式的首次报道。利用纯化的文昌鱼Vg和双醛固定的人A，B，O血红细胞及兔，鸡，蟾蜍，草鱼的血红细胞进行凝集活性测定。结果显示文昌鱼Vg对鸡，草鱼，蟾蜍的血细胞都有凝集活性，其中鸡和草鱼的凝集效价分别达到2¹⁰和2⁸，首次证明文昌鱼Vg是一种具有凝集活性的凝集蛋白。在糖专一性抑制实验我们发现文昌鱼Vg的凝集活性能够特异性的被D-半乳糖、D-葡萄糖明显抑制，其中D-半乳糖对Vg的凝集反应抑制作用最强，最小抑制浓变为62.5 mmol／L。利用单菌落计数法对文昌鱼Vg的抑菌实验表明，Vg对大肠杆菌有较明显的抑菌效果，最高抑制率可达到90％（Vg=390μg／ml）。Vg对金黄色葡萄球菌抑制效果不明显。这是首次报道卵生动物Vg的抑菌活性。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-6
第一章卵黄蛋白原研究概况  6-24
  1 卵黄蛋白原的合成  6-12
    1.1 卵黄的合成  6-10
    1.2 激素诱导下的卵黄蛋白原合成  10-12
  2 卵黄蛋白原的结构特性  12-19
    2.1 无脊椎动物的卵黄蛋白原  13-15
    2.2 脊椎动物的卵黄蛋白原  15-19
  3 卵黄蛋白原的生物学功能  19-22
  4 文昌鱼卵黄发生和卵黄蛋白原研究概况  22-24
第二章一种新的文昌鱼卵黄蛋白原的纯化及其鉴定  24-35
  1 前言  24-25
  2 实验材料和方法  25-28
  3 实验结果  28-33
  4 讨论  33-35
第三章文昌鱼卵黄蛋白原免疫功能的初步研究  35-47
  1 前言  35-36
  2 实验材料和方法  36-38
  3 实验结果  38-44
  4 讨论  44-47
结论  47-48
参考文献  48-63
致谢  63

文昌鱼一种新卵黄蛋白原的纯化、鉴定及其免疫防御功能的研究

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