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调控细胞CaM水平对细胞AOS产生的影响及与抗氧化系统的关系

作　者: 罗时苹
导　师: 龚明
学　校: 云南师范大学
专　业: 环境科学
关键词: 钙调素 钙调素结合多肤 抗氧化酶 转基因烟草 活性氧
分类号: Q942
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 39次
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内容摘要


本文以我们实验室最近建立的诱导性表达细胞质和细胞核CaM／CaMBP转基因烟草为材料，宋研究CaM与细胞AOS产生以及与抗氧化系统之间的关系。 本研究的结果主要分为三个部分： 第一部分是利用改进的磷酸二酯酶法测定了25个诱导表达细胞核CaMBP的转基因烟草株系的CaM活性，从中筛选出四个能较好诱导下调CaM活性的转基因烟草株系（8、9、13和15a）。研究了Tc诱导过程中CaM活性的动态变化，确定了诱导表达的适宜时间。 第二部分是利用第一部分检测到的四个诱导表达细胞核CaMBP的转基因烟草株系和一个诱导表达细胞质CaMBP及一个诱导表达细胞质CaM的转基因株系研究了Tc诱导过程中CaM活性的动态变化，然后进行了调控细胞CaM对AOS生成影响的研究。我们发现未转化的对照HO2020在Tc诱导和非诱导时AOS的含量基本没有变化。诱导上调和下调CaM活性均导致H2O2含量升高，而诱导上调CaM株系的O2-含量降低，诱导下调CaM株系的O2-含量升高。结果表明CaM能参与AOS生成的调控。 第三部分工作研究了Tc诱导过程中上述四个株系五种抗氧化酶GPX、CAT、SOD、APX、GR活性的变化。结果发现五种抗氧化酶活性的变化趋势与CaM活性变化一致，都是上调CaM则抗氧化酶活性升高，下调CaM抗氧化酶活性就降低，而未转化的对照HO2020在Tc诱导和非诱导时抗氧化酶活性基本没有变化。 这些结果表明，CaM参与了AOS生成的调控，而这种调控可能是通过CaM对抗氧化酶系统的调控来完成的。

全文目录


缩写表  4-6
摘要  6-7
英文摘要  7-9
Ⅰ 引言  9-13
Ⅱ 材料与方法  13-17
  一、 植物材料  13
  二、 处理方法  13-17
    1 、 Tc诱导  13
    2 、 CaM的提取  13-14
    3 、 CaM的测定  14
    4 、 无机磷的测定  14
    5 、 蛋白质的测定  14
    6 、 AOS的测定(H_2O_2含量测定和O_2~-含量测定)  14-15
    7 、 抗氧化酶的提取和活性测定  15-17
Ⅲ 实验结果  17-55
  一、 诱导表达细胞核CaMBP转基因烟草的筛选  17-27
    1 、 H4系列转基因烟草的CaMBP基因表达分析  17-18
    2 、 转基因烟草诱导一天或两天的检测结果  18-22
    3 、 TC诱导48小时内4个诱导表达细胞核CaMBP株系的CaM动态变化  22-27
  二、 诱导表达细胞CaM／CaMBP对烟草细胞AOS生成的影响  27-42
    1 、 Tc诱导24小时内转基因烟草叶圆片CaM动态变化  27-33
    2 、 Tc诱导24小时内转基因烟草叶圆片组织渗透液的H_2O_2含量动态变化  33-37
    3 、 Tc诱导24小时内转基因烟草叶圆片O_2~-含量动态变化  37-42
  三、 诱导表达CaM／CaMBP转基因烟草的五种抗氧化酶活性变化  42-55
    1 、 诱导表达CaM／CaMBP转基因烟草GPX活性变化  42-44
    2 、 诱导表达CaM／CaMBP转基因烟草CAT活性变化  44-47
    3 、 诱导表达CaM／CaMBP转基因烟草SOD活性变化  47-50
    4 、 诱导表达CaM／CaMBP转基因烟草APX活性变化  50-52
    5 、 诱导表达CaM／CaMBP转基因烟草GR活性变化  52-55
Ⅳ 讨论  55-58
  一、 诱导表达细胞核CaMBP转基因烟草各株系间的CaM表达差异  55
  二、 诱导表达细胞CaM／CaMBP对植物细胞AOS生成的影响及与抗氧化酶系统的关系  55-58
结束语  58-59
参考文献  59-67
致谢  67

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞学
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